应用PCR法和LAMP法鉴定牛早期胚胎性别的研究

来源 :新疆农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wyp345
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
在畜牧业生产实践中,往往需要人为控制家畜的性别及比例,加速优良品种繁育,扩大优良母畜的利用率,因而,性别控制技术在畜牧生产上具有重要的意义。随着农业产业化的进程,特别是牛羊胚胎工程产业化的迅速发展,运用性别控制技术来加快这种产业化的进程显得越来越重要。本研究旨在通过用PCR法、LAMP法进行牛早期胚胎性别鉴定的研究和应用,从而确立可以在实际应用中被推广的性别控制方法,提高养殖场和农户的经济效益,进而推动新疆乃至全国养牛业的发展。本研究主要做了以下方面的研究: 1.通过设计特异性引物,改变Mg2+浓度、退火温度、调整循环条件等影响PCR的因素,并且经过不同样品的验证,最终确定适合生产实践的PCR反应体系为: 双重PCR反应体系总体积为25μl:2.5μl 10×Buffer,1.5mM Mg2+,0.2mM dNTP,2U TaqDNA聚合酶,性控引物浓度为0.4μM(P0),内标引物浓度为0.15μM(P4)(性控和内标引物可单独加入同一反应液里)。94℃预变性5min,94℃ 30 s,55℃ 30 s,72℃ 30s;72℃延伸5min,33个循环。 巢式PCR第一次反应体系总体积为10μl:1μl 10×Buffer,2.5mM Mg2+,0.2mM dNTP,1U TaqDNA聚合酶,各引物浓度(P1,P5)为0.1μM。94℃预变性4min,94℃ 30 s,63℃ 30 s,72℃ 30 s;72℃延伸2min,20个循环;第二次反应体系总体积为20μl,2μl10×Buffer,2.5mM Mg2+,0.2 mM dNTP,2U TaqDNA聚合酶,各引物浓度均为0.25μM。94℃预变性5min,94℃ 30 s,63℃ 30 s,72℃30 s;72℃延伸5min,30个循环。 通过不同样品的试验和46枚胚胎现场的应用,证明建立的PCR胚胎性别鉴定方法可用于生产实践。 2.LAMP(Loop-mediated isothermal amplification)法是一种新的基因扩增技术,具有简便、准确、灵敏、快速的特点;通过不同样品、现场126枚常规胚胎和42枚性控胚胎的鉴定,结果证明该方法可应用于牛早期胚胎性别鉴定。 3.PCR法和LAMP法所鉴定同一样品的结果是吻合的,说明在控制好实验条件的情况下,根据实际情况可选用这两种方法的任何一种进行牛早期胚胎的性别鉴定应用。
其他文献
本科生教育在民族院校教育教学活动中占有重要地位.创新本科人才培养模式是民族院校提升人才培养质量,实现民族院校内涵发展的重要路径.高等教育是一种准公共产品,而民族高等
新时代图书馆在人性化管理方面仍存在一些问题:对图书馆的建设和发展重视不够,配套设施不完善,服务理念落后,规章制度体系不完善。基于这些问题,新时代图书馆人性化管理制度
在大学生学习专业知识的过程中,教师的指导有着举足轻重的作用.在信息化的浪潮下,高校教师要积极学习先进的教学技术,将信息技术和学科教学有效整合起来.在高校智育方面,教师
研究生培养模式直接关系到研究生的培养质量,是当前研究生教育工作改革与发展的重要着力点.单导师制培养模式存在着一些明显的局限性,如研究生培养容易受到导师个人能力、精
翻转课堂颠覆传统的学习过程,实现知识传递和知识内化的翻转,在践行“因材施教”教育理念、体现“以学生为中心”教学方式、突出“交互式”学习体验等方面具有显著的优势.以
Prostate cancer is the most common neoplasm diagnosed in men. Whilst treatment modalities have progressed, diagnostic investigations in terms of biopsy methods
对当前阶段我国城市环境中的体育行为进行分析与研究,发现体育行为受到了城市规划建设较大的制约和限制,恶劣的环境对体育行为有抑制作用,不合理的体育活动易导致城市环境的
就巢是影响家禽繁殖性能的主要因素之一,而催乳素是禽类就巢发生和维持的关键激素。从分子水平上探讨催乳素对番鸭就巢的调控,对鸭就巢分子机理具有重要的指导意义。本研究由番
AIM: To evaluate the efficacy of endoscopic ultrasonography-guided fine needle aspiration(EUS-FNA) for grading pancreatic neuroendocrine tumors(PNETs).METHODS:
本实验通过比较两种生精细胞(spermatogenenic cell)的培养方法,观察生精细胞体外培养过程中的生长行为,并检测增殖分化情况,以建立精子发生体外培养系统,为进一步研究精子发生机理