背景:抗体从发现至今一直都是热门研究领域,自免疫检查点机制被发现后,关于其中关键分子抗体的研究更是呈现爆发性增长。随着研究的深入,单抗因其分子量偏大,穿透性差而影响了其在临床上的广泛应用,故研发一类分子量更小、穿透力更强的抗体进行靶向治疗成为抗体研发领域的重要热点。鲨鱼等软骨鱼类产生的Ig NAR抗体是一种仅有重链的抗体,其可变区VNAR是目前已知的最小的完整抗原结合单位,是极具潜力能够取代传统单抗的新型抗体药物,因而备受关注。PD-1/PD-L1免疫检查点是当前肿瘤治疗研究的热门靶点,参与多种肿瘤的产生与发展,是个非常值得研究的靶点。针对PD-L1的VNAR抗体将会具有极高的未来应用前景与商业价值。目的:本课题主要是要通过免疫条纹斑竹鲨刺激其产生针对PD-L1的特异性抗体,利用转录组分析以及噬菌体展示等技术筛选获得单域抗体基因序列并进行表达验证。方法:通过大肠杆菌原核表达人源PD-L1蛋白的胞外段,并验证抗原表位的有效性,制备可以用于免疫的rh PD-L1胞外段蛋白。此外,通过生物信息学分析找出条纹斑竹鲨所产生Ig NAR恒定区的保守序列,表达该短肽并免疫新西兰大白兔获得条纹斑竹鲨Ig NAR血清检测抗体。分别以rh PD-L1胞外段蛋白和PBS对实验组与对照组进行免疫,免疫前一周取血用于血清中抗体滴度测定。抗体滴度达标后,取脾脏备用,部分样本进行转录组测序。剩余样本进行RNA提取并构建VNAR噬菌体展示文库。结合转录组数据与噬菌体文库筛选出针对rh PD-L1的特异性VNAR抗体,然后将抗体基因克隆至原核表达载体进行表达纯化并鉴定其与rh PD-L1的结合活性。结果:1)制备了可以检测条纹斑竹鲨血清中Ig NAR的兔多克隆抗体。2)构建了条纹斑竹鲨转录组文库,通过对比实验组与对照组上调基因以及生物信息学分析筛选到了5条VNAR序列。3)设计了16条VNAR噬菌体建库引物并建立起条纹斑竹鲨抗rh PD-L1 VNAR噬菌体文库。4)通过噬菌体文库成功筛选到20条能与rh PD-L1特异性结合的VNAR抗体序列。5)对所获VNAR序列进行原核表达并进行亲和力鉴定,结果显示这些VNAR抗体均能与rh PD-L1特异性结合且有较好的浓度梯度效应。结论:通过以上方法可以制备并筛选到能与rh PD-L1特异性结合的VNAR抗体,本研究能为免疫检查点疗法提供新的抗体选择思路与实验基础。