论文部分内容阅读
研究目的:探讨慢病毒介导的γ谷氨酰基羧化酶(Vitamin K dependent gamma-glutamyl carboxylase,GGCX)基因对兔骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响,以及对白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)表达的影响,从而为GGCX基因运用于骨性关节炎临床治疗提供理论依据。研究方法:1、选取12只雄性日本大耳兔采用膝关节前交叉韧带切断术构建模型,6周后将构建好模型兔处死,并进行软骨细胞的分离,培养,运用Ⅱ型胶原纤维染色和Alcian Blue染色法对培养的软骨细胞进行鉴定。2、将培养好的软骨细胞随机分成三组:空白对照组(不作处理)、阴性对照组(转染不含GGCX慢病毒)、转染组(转染含GGCX慢病毒)。运用qRT-PCR及Western blot检测各组软骨细胞中GGCX、Ⅱ型胶原、TNF、IL-1βmRNA及蛋白表达水平。3、采用Annexin V-FITC&PI法检测上述各组细胞凋亡情况。研究结果:1、第1代骨性关节炎兔软骨细胞呈多角形扁平状,可有多个突起,Ⅱ型胶原纤维染色后可见细胞及细胞外基质呈黄色或棕黄色,Alcian Blue染色后可见细胞呈现天蓝色。2、qRT-PCR和Western blot检测结果示:转染组GGCX及Ⅱ型胶原m RNA及蛋白水平表达较空白对照组及阴性对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),空白对照组及阴性对照组无明显差异(P>0.05);转染组TNF、IL-1βmRNA及蛋白水平表达较空白对照组及阴性对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),空白对照组及阴性对照组无明显差异(P>0.05)。3、Annexin V-FITC&PI法检测各组凋亡率结果示:转染组凋亡率为(17.833±2.577)%,较空白对照组(25.467±2.511)%及阴性对照组(26.167±2.616)%明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),空白对照组及阴性对照组无明显差异(P>0.05)。结论:1、膝关节前交叉韧带切断术可以成功构建骨性关节炎模型,并可以分离及培养出骨性关节炎软骨细胞;2、转染含GGCX慢病毒可以明显增加软骨细胞GGCX、Ⅱ型胶原的表达;3、转染含GGCX慢病毒可以明显降低软骨细胞TNF、IL-1β的表达;4、转染含GGCX慢病毒后可以抑制骨性关节炎软骨细胞凋亡。