海绵是一种重要的海洋药用无脊椎动物.海绵细胞体外培养是解决海绵药物供给不足问题最具希望和富有挑战性的课题.本研究旨在发展一种海绵干细胞体外培养方法,探索利用海绵干细胞体外培养建立海绵细胞系的可能性.论文以大连海域繁茂膜海绵的干细胞-原细胞为对象,研究了原细胞的鉴别、分离纯化及体外培养(增殖和分化)等问题. 首先,考察了繁茂膜海绵主要类型细胞在光、电镜下的形态结构特征.形成了在光镜下鉴别、计数原细胞的方法和标准.并应用BrdU摄取法和PCNA检测法,进一步证明了原细胞作为海绵干细胞所具有的增殖分裂潜力. 第二,建立了一种分离、纯化原细胞的新方法.利用原细胞与其它类型细胞的差异,形成了差速离心、选择性聚集、差速粘附和密度梯度离心四步集成分离方法.有效地实现了原细胞的富集,富集浓度达到了80﹪以上. 第三,比较了原细胞含量不同细胞体系的体外培养增殖特征.初步发现,原细胞具有活跃的增殖能力；高富集度原细胞体外原代培养过程中所显示的增殖和生物量增加能力,显著优于混合细胞和低浓度原细胞培养,首次实现了总细胞的倍增,显示了以原细胞为基础建立传代细胞系的可能性.高富集原细胞连续两次传代培养发现,由于原细胞的分化等原因,其增殖速率明显下降. 论文还研究了上皮和胶原细胞对原细胞分化的影响.初步发现,当该两种细胞与原细胞比例大于2:1混合培养时,所形成的细胞聚集体将分化成功能性小海绵.而高富集度原细胞培养,虽能发生一定分化,但不能发育成小海绵. 最后,本研究分离提取了造骨细胞特异性蛋白-硅聚合酶的抗体,并利用免疫组化方法来标记造骨细胞中的硅聚合酶,从而建立了一种原细胞分化终末细胞-造骨细胞的特异性标记方法.