目的：本研究的目的是观察异体骨软骨移植物在经历低温保护冻存后修复关节软骨(Articular Cartilage，AC)的效果，并对两个不同处理组进行比较。 方法：实验动物选取3～4月龄新西兰大耳白兔。将供体兔麻醉后，在严格无菌条件下行髌骨内侧弧形切口，逐层打开膝关节囊，暴露股骨关节面，在内、外侧股骨髁关节面上分别切取长方体骨软骨块，其关节面为宽3mm的正方形，AC及所带软骨下骨的全长约4mm。术中以汉克斯平衡盐溶液(Hank’s balanced salt solution，HBSS)湿润关节面。将所有移植物随机等分为两组，在其中一组的关节面上用普通大头针造孔若干个，作为实验组；另一组不造孔，作为对照组。将两组移植物经同样的低温保护程序处理后，转入液氮中保存96小时以上。进行手术植入时，按照移植物的组别将受体动物随机等分为实验组和对照组。以取材时所用的手术方式打开右侧膝关节囊，暴露股骨内侧髁关节面，切除局部骨软骨组织，制做与移植物一致大小的新鲜缺损区。由液氮中取出移植物，迅速置入37℃恒温水浴箱内复温2～3分钟。再以HBSS冲洗3遍后，植入宿主骨床，轻轻摁压，使之与周围组织紧密接触，检查膝关节活动度后，逐层闭合伤口，不用外固定。术后将动物置笼中，以普 中文摘要通颗粒饲料喂养。 于术后第4周及第8周时分次处死动物，打开膝关节囊，暴露股骨末端，立即对移植物进行摄片，并观察其整体塑形、色泽及有无裂隙、关节周围有无骨赘形成等。用组织锯切取包含格植物在内的局部骨软骨块，再时其中一小部分保存于士0℃冰粮中，用作氨基酸分折；余者回定于 10％甲醛中，用于制作切片。同时切取健侧卜肢的股骨头及半月板，分别作为氨基酸分祈时透明软骨与纤维软骨的正常对照。将用于组织学检查的标本固定24小时以上，然后以脱钙液处理3大，每大换液1次，再以流水冲洗二天后，进行常规脱水与石蜡包埋。用石蜡切片机切成5 pm厚的切片，漂浮5去将切片贴附于清洁载玻片卜，进厅常规HE染色，中性树胶封片，光镜观察。选取 Shapiro和 Glimcher提出的 AC退变量化评分标准，m于移植物修夏效果的定量评估。进行氨基酸分折测试时，用锐利刮刀剔除移植物中的软骨，以同样方法剔除留作透明软骨对照的健侧股骨头软骨，再将留作纤维软骨对照的健侧半月板剪切为小颗粒状。将上述三种软骨成分分别作为待测样品置入烤箱内充分烘干，加入6N盐酸充分水解。后将水解液过滤、定溶及蒸干，I：氨基酸分析仪，测主茫赖氨酸及羟脯氨酸的含量，恨据义比值推测样品中胶原纤维的类型。对于两处理组中软骨退变的形态学评分结果用无参数的Wilcoxon检验，对工氨基酸分析纬果用单Ik素厅差分祈（ANOVA）及 qt六验（即 Ne八－n。an Keuls 7去）处理。 结果：术后4周时人体观染11）见两处理纠动物的丁 中文摘要 术关节活动度较好，很少有粘连、骨赘等并发症。修复 的关节整体观塑形良好，恢复原有轮廓。移植物关节面 平滑有光泽，与周围界线模糊。术后8周时，两处理组 动物的手术关节活动度良好，未见粘连，且运动频度较 四周时明显增高。修复的关节整体观塑形尚好，外观依 然平滑，但移植物关节面显示出颜色变化，有的出现暗 红色斑块，有的部位呈乳白色。 关于组织学观察，两个处理组的镜下表现同大体观 察一样难以辨别差异。术后4周时，可见移植物中软骨 细胞呈放射状排列，胞核形态基本正常，分裂增殖现象 在与宿主AC邻接的部位尤其明显，甚至在软骨陷窝内 形成多个细胞的克隆团块。宿主AC与移植物AC的连 接方式可有如下几种：（l）二者界限清晰的紧密接触，伴 或不伴有宿主软骨衍生成分部分覆盖植入的软骨；仪）宿 主AC与移植物AC形成桥状连接，深层有裂隙存在；O） 活跃增生的转化组织占位将二者连接。移植物的潮线清 晰可辨，软骨下骨与周围骨床融合，可见丰富的血管组 织长入，提示爬行替代作用进展顺利。软骨基质保持正 常的染色特征，着色均匀。至术后8周时，软骨组织表 现出明显的退行性改变，同时伴有软骨细胞的缺失，其 中缺失最严重的部位在软骨的外层。累及的软骨细胞发 生核固缩、核溶解，细胞溶解缺如，陷窝空虚，甚至塌 陷。许多软骨细胞被拉长，并呈嗜碱性染色。在软骨的 深层，一些软骨细胞的核得以保存，但数量很少。软骨 基质的染色特性依然保持，但着色程度降低。对两个处 理组移植物修复效果的定量评估结果在上述两个时间点 3 中文摘要均无统计学差异c 在移植术后4周及8周时，将?