论文部分内容阅读
目的本研究拟采用胶原酶消化法培养子宫腺肌病病灶组织细胞,通过体外细胞实验观察芍药甘草汤对子宫腺肌病痛经患者的病灶细胞ER、MEK-2、Raf、Ras表达水平的影响,及ER、ERK/MAPK信号通路相关因子表达的调控,以期阐明中药复方止痛的深层作用机理。方法选择2012年3月-2012年12月于广州中医药大学第一附属医院妇科住院要求手术的子宫腺肌病痛经患者8例,取其病灶组织用于培养。采用胶原酶消化法对人子宫腺肌病细胞进行原代培养,并采用免疫细胞化学技术鉴定。采用免疫细胞化学技术检测芍药甘草汤(高浓度组20mg/ml,低浓度组10mg/ml)对子宫腺肌病痛经患者的病灶细胞ER、MEK-2、Raf、Ras表达水平的调控,并以米菲司酮(RU486)作为西药对照组。结果1成功培养5例子宫腺肌病细胞并均经免疫细胞化学法鉴定证实。2对ER的影响：与空白对照组相比,各组细胞ER表达均有不同程度下降,芍药甘草汤高浓度组及低浓度组子宫腺肌病病灶细胞ER表达差异有统计学意义(P<0.05)；而与芍药甘草汤低浓度组相比,芍药甘草汤高浓度组子宫腺肌病病灶细胞ER表达有下降,且差异有统计学意义(P<0.05)。3对MEK-2的影响：与空白对照组相比,各组细胞MEK-2表达均有不同程度下降,其中芍药甘草汤高浓度组及RU486组子宫腺肌病病灶细胞MEK-2表达差异有统计学意义(P<0.05),芍药甘草汤低浓度组子宫腺肌病病灶细胞MEK-2表达差异无统计学意义(P>0.05)。4对RAF的影响：与空白对照组相比,芍药甘草汤高浓度组及芍药甘草汤低浓度组子宫腺肌病病灶细胞RAF表达均有不同程度的下降,而差异均无统计学意义(P>0.05)。5对RAS的影响：与空白对照组相比,芍药甘草汤高浓度组及芍药甘草汤低浓度组子宫腺肌病病灶细胞RAS表达均有不同程度的下降,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论1芍药甘草汤高浓度组可以有效降低子宫腺肌病病灶细胞ER、MEK-2、RAS的表达,芍药甘草汤低浓度组可以有效降低子宫腺肌病病灶细胞ER、RAS的表达。2芍药甘草汤作用于子宫腺肌病病灶细胞,可能通过调控细胞ER及MEK-2、RAF、RAS蛋白的表达,而雌激素的生物学效应大小与靶细胞内ER高低有关,当ER表达降低时,E2与ER结合率降低,雌激素的生物学效应降低,阻断或减少了异位病灶组织在肌层内种植、生长,雌激素对子宫蠕动的调节作用减缓,子宫收缩性减弱,从而缓解或消除痛经。另一方面,当ER表达降低时,则抑制MAPK信号通路,减弱子宫腺肌病病灶细胞的异常增殖,阻碍了子宫腺肌病的发展,从而减缓了子宫平滑肌的收缩强度,子宫收缩性减弱,有效缓解了子宫腺肌病患者的痛经症状,此可能是芍药甘草汤治疗子宫腺肌病的主要机理之一。