【摘 要】
：
【目的】ras基因是最常见的肿瘤驱动基因,也是近年来热门的肿瘤靶向治疗的靶基因。ras基因家族主要包括H-ras、N-ras和K-ras。ras基因表达产物是参与信号传导的膜结合蛋白,分子量为21k Da,故也称为p21Ras蛋白。ras驱动肿瘤治疗药物的研究与开发,对于治疗癌症具有重大的意义。本实验室前期使用p21Ras作为免疫原制备了抗p21Ras单链抗体KGH-R1 scFv,实验室研究表明
论文部分内容阅读
【目的】ras基因是最常见的肿瘤驱动基因,也是近年来热门的肿瘤靶向治疗的靶基因。ras基因家族主要包括H-ras、N-ras和K-ras。ras基因表达产物是参与信号传导的膜结合蛋白,分子量为21k Da,故也称为p21Ras蛋白。ras驱动肿瘤治疗药物的研究与开发,对于治疗癌症具有重大的意义。本实验室前期使用p21Ras作为免疫原制备了抗p21Ras单链抗体KGH-R1 scFv,实验室研究表明,在没有合适的穿膜载体的携带下,KGH-R1 scFv无法穿透细胞膜。所以,我们选择了具肿瘤特异性的RGD穿膜肽作为载体,携带抗p21Ras单链抗体KGH-R1 scFv融合表达形成重组抗体RGD-KGH-R1 scFv,进入肿瘤细胞。最终,我们建立了RGD-KGH-R1 scFv的原核表达纯化工艺,获得具备较好生物学活性的重组抗体。经10株肿瘤细胞系的体外实验验证表明,该重组抗体有较好的抑瘤活性。前期研究局限于体外细胞表型实验研究,缺少更为直观的RGD-KGH-R1 scFv对于肿瘤细胞行为影响的动态观测以及RGD-KGH-R1 scFv与肿瘤细胞内p21Ras的共定位情况。同时RGD-KGH-R1 scFv重组抗体在体内治疗裸鼠移植瘤的效果如何尚不清楚,无法为其作为一种候选药物提供前期动物实验支持。为了使该药物可以成为新的抗肿瘤候选药物并进入临床应用,本课题按照实验室前期建立的KGH-R1 scFv制备工艺获得KGH-R1 scFv重组蛋白,选用前期体外实验效果敏感的细胞株A549（人肺癌细胞系）、HCT116（人结肠癌细胞系）,通过免疫荧光实验验证RGD-KGH-R1 scFv与肿瘤细胞内p21Ras的共定位情况。采用Nanolive3D Cell Explorer-fluo系统观察RGD-KGH-R1 scFv对于A549细胞的行为影响,建立HCT116裸鼠移植瘤模型,确定RGD-KGH-R1 scFv体内给药时最佳注射方式,同时按照《抗肿瘤药物药效学指导原则》相关规定进行体内抗肿瘤效果的主要药效学评价。【方法】采用大肠杆菌自诱导表达系统制备RGD-KGH-R1 scFv重组抗体,收集到的蛋白经镍离子亲和层析的方法进行纯化,纯化后的蛋白稀释后经过尿素梯度透析复性,最终获得由SDS-PAGE、WB鉴定后的RGD-KGH-R1 scFv重组抗体;免疫荧光检测RGD-KGH-R1 scFv重组抗体穿透细胞膜后与细胞p21Ras蛋白共定位情况;动态细胞培养实验采用Nanolive3D Cell Explorer-fluo系统观察实时监测RGD-KGH-R1 scFv重组抗体对A549细胞的行为影响;构建HCT116裸鼠移植瘤模型,进行RGD-KGH-R1 scFv重组抗体在体内抑制肿瘤生长实验研究。【结果】1、按照实验室前期建立的RGD-KGH-R1 scFv重组抗体表达纯化工艺,获得目的蛋白结果符合预期。2、免疫荧光实验证明RGD-KGH-R1 scFv重组抗体能够穿透肿瘤细胞膜并与细胞内p21Ras蛋白共定位。3、细胞培养实验实时动态观察RGD-KGH-R1 scFv重组抗体与A549细胞共培养后能够导致A549细胞死亡。4、RGD-KGH-R1 scFv重组抗体体内抗肿瘤研究确定了RGD-KGH-R1scFv重组抗体体内给药时的最佳注射方式;研究表明RGD-KGH-R1 scFv重组抗体治疗能够有效抑制裸鼠移植瘤的生长和促进肿瘤凋亡,联合曲美替尼用药,效果更佳。【结论】1、RGD-KGH-R1 scFv重组抗体能够穿透肿瘤细胞膜并与细胞内p21Ras共定位,导致细胞死亡,表明RGD-KGH-R1 scFv有较好的体外抗肿瘤活性。2、腹腔注射RGD-KGH-R1 scFv重组抗体能有效抑制裸鼠移植瘤的生长。
其他文献
在我国社会主义建设初期,经济文化工作开展并不完善,水平相对落后,因此在过去的发展中片面追求了经济的增长,导致了对生态环境保护的忽视和破坏,造成了严峻的生态形势。习近平生态文明思想是我国在生态文明理论方面创造的历史性突破,而在其指导的治理实践中,国家生态治理的重要性逐步得到呈现和重视。本文对习近平国家生态治理观进行专门的梳理和分析,主要是为了更好地贯彻落实习近平新时代生态文明建设理论,以更好地提升我
上个世纪八十年代是中国企业在改革开放的大潮中,抓住机遇,不断发展壮大的历史时期,同时也是在这一时期,企业文化的概念和理论逐渐被我国的企业所接受。国有股份制商业银行在众多国有企业中是特殊的存在,它承担着服务国家经济建设、服务实体经济、防范金融风险和促进民生方面的作用。随着大数据、区块链等信息技术不断推陈出新,新金融、绿色金融等理念相继被提出,对国有股份制商业银行如何提高其核心竞争力提出了更高的要求。
经济特区历经四十年发展,取得了丰硕的建设成果,推动中国经济实现了腾飞,但新时代,经济特区背负着进行新一轮改革开放的新使命,同时又在经济发展、体制改革、弘扬特区精神等方面存在着许多问题。而高校作为立德树人和文化传承的主阵地,也亟需精神力量来推动文化育人。特区精神作为一种精神力量强力推动着特区建设与改革开放,又因蕴含丰富思想政治教育素材而彰显出丰富的育人价值。因此,新时代继续大力弘扬“特区精神”是十分
恽代英是中国共产党历史上早期的革命家、思想家、教育家、宣传家,是中国早期先进知识分子的代表。在探索救亡图存之路上,他经过不断学习思考,逐渐形成了马克思主义观。恽代英在探索马克思主义的过程中,以笔为矛,投身实践,在理论阵地和实践活动中宣传马克思主义,一方面研究马克思主义基本原理,另一方面将理论付诸近代中国的实践之中,为马克思主义在中国的传播作出了重要贡献。本文在梳理恽代英马克思主义观形成的时代背景及
空气是地球上动植物生存的必要条件,其质量直接影响到生命活动的健康水平。随着人类粗放式推进工业化和城市化,空气污染物排放量激增,引发了严重的空气质量问题。作为定量参考的依据,空气质量的预测结果对保障空气污染治理的科学性和有效性具有重要意义,也对城市的环境质量管理和居民生活质量保障发挥着重要作用。然而,空气质量序列往往呈现非平稳、非线性和高噪音等复杂特征,难以被精准和可靠的预测。此外,不同地区或同一地
随着网络新技术在社会不同领域的广泛运用和发展,互联网数据总量逐年递增,大数据时代来临,逐渐成为政府部门的新战略资源,为政府公共服务和创新治理提供了新工具和新方法。党的十六届六中全会明确提出要建设服务型政府,强化社会管理和公共服务智能,社会各界热切关注服务型政府的建设。党的十九大报告强调优化政府治理、建设人民满意的服务型政府,是推进国家治理体系和治理能力现代化的重要内容。在《关于加强质量认证体系建设
全球竞争背景下,企业逐渐摒弃过去重产量轻质量的做法,在市场竞争中通过提升科学技术水平来提高产品质量,在一定意义上标志着国家进步和科技现代化水平的增长。在这种状况下,生产制造企业对于产品质量的控制需要采取事前预防方式,而非事后补救的管理手段尤为重要。新时代下如何面对产品质量预测难题,在生产环节应用行之有效的预测手段,如何适应产品在生产全周期的规律以及进一步提升产品质量,都值得系统的探索。目前,国内对
汽车智能工厂是汽车制造与信息化融合的产物,其基于各种信息技术,将数字化、网络化和智能化贯穿在汽车产业全生命周期的各环节,实现稳定且高效的生产和高品质的服务,保障汽车产品的高质量,最终促进汽车产业的创新、绿色、协调、开放、共享。汽车智能工厂高质量发展的关键之一是绩效评价,一个科学且合理的评价绩效评价不仅能有效揭示拟评价汽车智能工厂发展的质量与效率水平,而且可发现其与其他智能工厂在高质量建设发展存在的
“五育”融合是新时期我国实现教育高质量发展的重要要求。文章在明晰高中地理教学中“五育”内涵的基础上,挖掘地理学科核心素养中的“五育”融合点,生成互动关联机制,并以此搭建“五育”融合和地理学科育人之间的“桥梁”,进而提出地理教学走向“五育”融合的路径。
＜正＞《普通高中地理课程标准（2017版2020年修订）》中，学业质量被划分为四级，水平1至水平4由低到高逐渐递进，同时新课标在教学实施建议中明确提出要重视问题式教学。新教材分为必修、选择性必修以及选修，其中选择性必修在必修基础上进行加深或拓展，也能体现学习进阶性。新高考赋予学生充分的自由选择权，为使地理课堂更具特色，更好应对新变化，基于学习进阶的问题式教学设计则是这一背景下的新探索。