不同LEA抗逆基因的旱稻转化及后代分析

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作为一个农业大国,我国对水稻的生产育种进行了各种研究,利用杂交、转基因等手段进行了各种抗逆性状水稻新品种的培育。近些年,水分的短缺严重影响着水稻的产量和质量,因此,节水抗旱稻的研究变得尤为重要。与水稻相比,旱稻在缺水条件下相对易于成活,但是旱稻的种植本身还有一些不足之处,比如田间杂草,土壤盐碱化等恶劣因素还在一定程度上影响着旱稻的产量和质量。所以,对旱稻本身的性状进行改良也具有重要意义。本课题使用“鲲旱1号”作为转化受体,利用农杆菌侵染法,把三种LEA(Late Embryogenesis Abundant Proteins)家族基因8981、DEHY和8704分别转入“鲲旱1号”中。实验获得了不同LEA基因旱稻转化植株,把三种基因的转化结果进行了比较分析。对所得T1代转化植株进行了DNA分子水平的阳性检测,对T2代株系进行了初步的纯合筛选,最后对初步筛选出的纯合株系进行了Southern杂交分析。愈伤诱导过程中,切芽操作显著提高了愈伤组织的质量和数量。通过三种基因转化结果的比较可知,转DEHY基因材料转化的绿点率和分化率最高,其次是8981基因,8704基因转化的绿点率和分化率最低。通过PCR阳性鉴定结果可以看出,其阳性率也有所不同,转DEHY基因植株阳性率最高,其次是8981基因,8704基因转化植株阳性率最低。在除草剂筛选阶段,通过预实验确定出除草剂筛选阳性植株的最适浓度为0.5 mg/m L,并初步筛选出了T2代阳性株系中疑似纯合的株系。在Southern杂交分析过程中,对酶切体系进行了调整,确定了最佳上样量为15μg;并找出了最适宜的严谨洗涤温度为68℃,最后从转化植株中筛选出了能够稳定遗传的单拷贝纯合LEA基因转化株系。
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