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血小板输注在临床输血中具有重要的意义。然而血小板储存过程中可能发生不同程度的活化,分泌血小板微粒(platelet-derived microparticles, PMPs)和可溶性CD40配体(soluble CD40ligand, sCD40L, CD154)等一系列具有重要的生物学功能的促炎因子。在其刺激下,多形核中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophil, PMNs)可快速移位至肺毛细血管部位,经引发活化后产生呼吸爆发,释放大量的超氧阴离子和活性氧,导致组织损伤,诱发输血相关急性肺损伤(TRALI)的发生。本文主要研究血小板储存过程中,储存血小板血浆(以下简称血浆)及PMPs引发PMNs呼吸爆发,介导人肺微血管内皮细胞(HMVECs)损伤的作用。重点讨论储存血小板制品中PMPs的性质和生物学功能以及SCD40L的作用。本研究取储存第1天、第3天和第5天的单采血小板(A-PLTs)和白膜法浓缩血小板(BC-PLTs)样品低速离心分离获得血浆,取血浆超速离心获得PMPs。 ELISA检测血浆及PMPs中sCD40L的含量；抗体抑制实验评价血浆中sCD40L的作用。免疫电子显微镜观察PMPs形态及sCD40L的表达。Western Blotting检测携带的CD40L蛋白分子的存在形式。以绝对细胞计数微球通过流式细胞术检测血PMPs浆中数量。用活性氧特异性荧光探针二氢若丹明123(DHR)流式细胞术PMPs检测呼吸爆发。建立(?)PMNs两次打击细胞模型,评价TRALI对PMPs介导的PMNs损伤的作用。HMVECs结果显示,在血小板1-5天储存过程中,血浆中BC-PLTs含量逐渐递sCD40L增,第3天达到峰值(P>0.05)；而血浆中A-PLTs含量第3天即显著增加sCD40L(P<0.01),第5天达到峰值。随血小板储存时间延长,血浆引发活化的fML呼吸爆发的程度亦逐渐增强,储存第3天的血浆比第1天的血浆对PMNs的引发活性显著提高(P<0.05)。A-PLTs血浆对PMNs的引发活性高于BC-PLTs血PMNs浆。用小鼠抗人CD154抗体特异性去除血浆中的A-PLTs或用0.1μm滤器滤除后,可部分抑制血浆引发sCD40L活化的PMPs呼吸爆发。fMLP电子显微镜下观察PMNs呈<1μm的囊泡结构,表面携带CD40L且呈不均匀分PMPs布。Western Blotting结果显示PMPs所携带的CD40L分子量处于26-34kd之间。随A-PLTs储存时间的延长,血浆中PMPs数量及表面携带的sCD40L的量增加,PMPs引发呼吸爆发的程度增强,储存第3天比储存第1天的血浆中分离获得的PMPs引发PMN呼吸爆发的活性显著增强(p<0.05)。TRALI两次打击细胞模型实验显示,储存血小板制品中分离的PMPs可引发LPS活化的PMNs呼吸爆发,导致HMVECs的损伤。综上所述,目前血库血小板储存条件(22℃,5天)下,血浆中PMPs数量和sCD40L含量升高。PMPs表面携带的sCD40L可能是在PMPs引发PMNs呼吸爆发,进而诱导HMVEC损伤的效应分子之一。由此证明,输注血库储存的血小板制品可能对TRALI的发生具有一定的影响。进一步研究PMP及所携带的sCD40L引发PMN呼吸爆发的机制,将为阐明TRALI的发病机制提供相关的实验依据。