目的:朊病毒疾病是由朊蛋白错误折叠引起的一类神经退行性疾病,也称为传染性海绵状脑病。错构的朊蛋白结构中α螺旋结构比例下降,β折叠结构比例上升,造成这种错构朊蛋白积聚成纤维状,引发神经细胞的凋亡。这种错构的朊蛋白被称为朊病毒,可通过食物、血液等在动物中传播,进入宿主内的朊病毒可诱导宿主正常朊蛋白错构,从而完成疾病的传染。朊病毒在小鼠和仓鼠之间传播具有屏障作用,表现为实验动物的发病的潜伏期延长,发病率低下。除了株系的原因之外,朊病毒的传播屏障主要是由异源朊蛋白的氨基酸位点的差异造成的。小鼠和仓鼠存在11个氨基酸位点的不同,且每个位点对小鼠和仓鼠之间朊病毒传播的影响程度不同。我们在仓鼠朊蛋白的基础上构建了不同的向小鼠朊蛋白氨基酸突变的多位点突变体朊蛋白,利用PMC A技术和体外重组朊蛋白技术,探究不同位点组合能否跨越朊病毒在小鼠和仓鼠之间传播的种属屏障。方法:在合成的质粒模板上,设计多个位点的突变引物,由仓鼠向小鼠突变。得到的突变载体模板经测序正确后,转化进BL21大肠杆菌,挑选单克隆并进一步诱导表达重组朊蛋白。将得到的重组朊蛋白与小鼠朊病毒(PrP^Sc)一起进行PM CA实验,观察小鼠朊病毒能否诱导多点位突变仓鼠朊蛋白产生错构,通过PK消化处理PMCA产物检测其PK抗性进行验证。结果:成功构建了7个多点突变的重组朊蛋白基因,其中包括4个3突变位点、2个4突变位点和1个5突变位点。经测序正确后,转化大肠杆菌诱导表达,经过Ni-NTA亲和层析后得到重组蛋白。在配制底物体系后,与小鼠PrP^Sc进行P MCA实验,检验转化结果。结果显示HaPrP（M111V-M138I-I204M）转化的构象得到了经PK消化后具有致病能力的17 kD片段,其他突变体都出现了经PK消化后的无致病能力的14 kD片段。结论:PMCA结果显示,经过PK消化后,在7种突变体里面只有HaPrP（M111V-M138I-I204M）这个突变体得到了17 kD片段的致病构象,没有出现无致病的14 kD片段无致病构象。而其他3突变体及更多位点的4突变体和5突变体既得到经PK消化的无致病构象14 kD片段也得到了经PK消化有致病构象的17 kD片段,这2种不同构象的同时存在可能不会使接种的动物患病,无法实现跨越种属屏障。同时M111V、M138I和I204M与先前得到的影响小鼠-仓鼠朊病毒传播的G54ins、I138M和M204I 3个位点结果并不完全一致。说明单个氨基酸位点作用并不是简单的叠加效果,有可能这些位点还存在空间上的相互作用。本文通过重组朊蛋白和PMCA技术,得到了克服小鼠和仓鼠种属屏障的3突变朊蛋白,阐述了小鼠和仓鼠朊病毒种属间传播的关键氨基酸位点,进一步验证了构象选择理论。