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结直肠癌(colorectalcancer，CRC)是常见的恶性肿瘤之一，其发病率在恶性肿瘤中列第四位，死亡率为第二位。据统计，我国大肠癌的发病率有逐年升高的趋势，死亡率在上升，5年生存率仍徘徊不前，然而手术联合放疗化疗效果并不十分理想，所以有必要探索治疗结直肠癌新途径。近年来，许多国内外学者研究证明某些非靶器官肿瘤如大肠癌组织中存在性激素受体，并开始研究其作用及探索内分泌治疗结直肠癌，有一些成功报道。1996年发现一种不同于原先人们熟知的雌激素受体亚型并命名为雌激素受体β(estrogenreceptorβ，ERβ)，原先的ER则被命名为雌激素受体α(estrogenreceptorα，ERα)。临床和实验的证据提示结肠癌细胞株、肿瘤组织中具有功能性ERβ的表达。但到目前为止，仍未完全清楚雌激素受体β在大肠癌中表达的意义。进一步研究雌激素受体亚型α、β与大肠癌的相关关系将为临床大肠癌的内分泌治疗提供可靠的理论依据和客观指标，从而探索治疗结直肠癌新的途径，这方面的工作肯定是十分有意义的。
本研究探讨了结直肠癌中雌激素受体亚型α、β的表达及其意义，并尝试用雌激素受体拮抗剂进行了体内体外实验研究。
第一部分1114例大肠癌组织雌、孕激素受体状况分析
目的：研究大肠癌患者癌组织雌孕激素受体状态分布及与临床病理因素的关系，探讨ER、PR在结直肠癌中的表达及意义。
方法：回顾术后石蜡标本用免疫组化方法进行了雌、孕激素受体检测的1114例大肠癌患者的临床资料，建立数据库，用统计软件对ER、PR的表达与患者的年龄、性别、原发肿瘤部位、大小、病理大体类型、组织类型、病理分级、肠壁浸润、淋巴结转移、远处转移及Dukes分期等临床病理因素相结合进行卡方检验及单因素Logistic回归分析(Enter法)，并建立多因素回归模型采用非条件Logistic回归分析(Forward：LR方法)。
结果：1.本组肠癌ER的表达率9.4％，PR的表达率是15.4％。ER(+)病例中PR(+)为97.9％，ER(-)病例中PR(-)为80％，ER，PR一致率为92％。2.ER和PR的表达呈显著正相关(P＜0.05)。3.ER和PR的表达率和病理分级相关有显著性意义(P＜0.05)。4.多因素Logistic回归结果显示ER和PR的表达率和年龄分布无关(P＞0.05)，与性别、原发肿瘤部位、大小、病理大体类型、组织类型、肠壁浸润、淋巴结转移、远处转移及Dukes分期之间关系无显著差异(P＞0.05)。
结论：部分大肠癌表达ER、PR，提示大肠癌可能是性激素依赖性瘤，可为制定内分泌治疗提供依据。大肠癌患者雌孕激素受体状态分布有一定的规律，对判断病理分级有一定意义。
第二部分利用组织芯片研究ERα、ERβ的表达
目的：观察ERα、ERβ在结直肠癌癌组织、癌旁组织中表达的情况。研究ERα、ERβ的表达与各病理因素及复发预后的关系。探讨ERα、ERβ在结直肠癌中的表达及意义。
方法：收集1997～1998年95例手术治疗结直肠癌临床资料，均有明确病理诊断及完整的随访记录。利用组织芯片免疫组化法测定ERαERβ在结直肠癌癌组织、癌旁组织中表达的情况。对数据资料进行各病理因素卡方检验及单因Logistic回归分析(Enter法)并建立多因素回归模型，采用非条件Logistic回归分析(Forward：LR方法)，Kaplan-Meier生存分析法绘制生存曲线，Log-rank法进行生存曲线比较。
结果：1.95例原发灶各取了两点45例瘤旁正常组织取一点，制成1个受体蜡块，共235个组织块，由于移位或脱失，最后可供数据统计分析的例数各指标不等。2.本组结直肠癌癌组织ERα的表达率35.4％，ERβ的表达率78.0％。癌旁组织ERα的表达率9.5％，ERβ的表达率60.5％。3.癌组织ERβ的表达高于ERα(P＜0.05)，ERα的和ERβ的表达率无关(P＞0.05)4。结直肠癌癌组织ERα的和ERβ的表达高于癌旁组织(P＜0.05)。5.ERα的和ERβ的表达率和病理分级相关有显著性意义(P＜0.05)。6.ERα的和ERβ的表达率和年龄分布无关(P＞0.05)，与性别、原发肿瘤部位、大小、病理大体类型、组织类型、肠壁浸润、有无淋巴、远处转移及Dukes分期之间关系无显著差异(P＞0.05)。7.ERα的和ERβ的表达与复发转移及预后无关(P＞0.05)。
结论：结直肠癌癌组织ERα的和ERβ的表达高于癌旁组织，对判断病理分级有一定意义。ERα的和ERβ的表达率和年龄分布无关，与性别、原发肿瘤部位、大小、病理大体类型、组织类型、肠壁浸润、淋巴结转移、远处转移及Dukes分期无关。ERα的和ERβ的表达与复发转移及预后无关。
第三部分ERβ在结肠癌细胞株中的表达及他莫昔芬对结肠癌细胞株体外抑制实验研究
目的：探讨ERβ在结肠癌细胞株Lovo、HT-29中的表达情况和他莫昔芬(tamoxifen，TAM)对结肠癌细胞株的生长抑制作用方法：体外培养人结肠癌细胞株Lovo、HT-29，用细胞爬片免疫组化方法、RT-PCR、Westernblot方法检测ERα、ERβ表达，用MTT比色法法检测不同浓度的17β-E2、TAM、5-Fu、TAM+5-Fu、TAM对结肠癌细胞株的生长影响作用。用Burgi法：Q=平均E(A/2+B/2)/(平均EA/2+平均EB/2)分析药物相互作用。流式细胞仪(FCM)测定细胞胞凋亡率。统计学处理采用多个样本均数比较的单因素方差分析法。
结果：
l、在结肠癌细胞株Lovo、HT29中稳定表达ERβ而不表达ERα。
2.TAM、5-Fu能抑制Lovo、HT29细胞株的增殖，这种抑制作用呈剂量依赖性。各药物对Lovo、HT29细胞株的IC50值：5-FuIC50值分别为3.81±0.34μmol/L和4.11±0.63μmol/L。TAM对Lovo、HT29细胞株IC50值分别为15.52±1.33μmol/L和16.23±2.85μmol/L。3.E在10-4-10-9M浓度下与对照组相比无显著性差异(p＞0.05)。4、TAM与5-Fu协同对Lovo、HT29细胞株的Q值分别是1.13±0.02和1.21±0.11，TAM能协同5-FU抑制Lovo、HT29细胞株的增殖。5.流式细胞仪检测表明TAM有显著促细胞凋亡的作用。TAM可协同5-FU对Lovo、HT29细胞株促细胞凋亡的作用。
结论：1、结肠癌细胞株Lovo、HT29表达ERβ而不表达ERα。2、TAM以ERβ为靶点抑制Lovo、HT29细胞株的增殖，这种抑制作用呈剂量依赖性。3、TAM有显著促结肠癌细胞株凋亡的作用。4、TAM协同5-FU抑制Lovo、HT29细胞株的增殖，TAM协同5-FU对Lovo、HT29细胞株促细胞凋亡的作用。
第四部分他莫昔芬对荷瘤裸鼠结肠癌移植瘤生长抑制实验研究
目的：建立荷人结肠癌的裸鼠动物模型，观察TAM、5-Fu、TAM+5-Fu对移植瘤生长的影响。
方法：裸鼠32只，雌雄各半，5-7周龄。体重：20-32g.成瘤方法：以荷人结肠癌细胞株Lovo瘤裸鼠的移植瘤为瘤源接种。裸鼠成瘤后给药三周，均分为TAM组、5-Fu组、联合组、对照组。给药方法：TAM剂量为20mg/kg·d体重，capcitabine剂量为300mg/kg·d体重，制成悬溶液灌胃，每日2次，时间为三周。对照组相应同时给等量生理盐水。停药48小时后处死。每3天测量体积，称体重。处死后称瘤重、体重、测量体积和用细胞凋亡检测试剂盒测定裸鼠移植瘤凋亡水平。统计学处理进行样本检验，用析因方差统计分析药物相互作用。
结果：1.TAM组、Fu组、联合组均可抑制肿瘤生长(P＜0.05)。2.析因方差分析未能证明协同作用(P＞0.05)3。TAM组、FU组、联合组均可诱导裸鼠移植瘤的凋亡，有明显差异(P＜0.05)。4移植瘤均表达ERβ而不表达ERα.结论：TAM抑制了荷瘤裸鼠结肠癌细胞株Lovo移植瘤的生长并能促进移植瘤的细胞凋亡。