卫矛与藜上病毒的检测与鉴定

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本研究使用了转录组测序技术、RT-PCR扩增技术以及透射电镜观察等实验技术,对辽宁沈阳地区采集到的桃叶卫矛黄斑驳叶片样品和藜皱缩叶片样品进行分析。通过鉴定得出结论:桃叶卫矛黄斑驳病症伴随的是这一症状的病毒是一种新病毒,该病毒属于甲型线性病毒科(Alphaflexiviridae)马铃薯X病毒属(Potexvirus);藜叶片皱缩病症伴随的是豇豆花叶病毒科(Comovirinae)蚕豆病毒属(Fabavirus)中的蚕豆萎蔫病毒2号(Broad Bean Wilt Virus 2,BBWV2)。本研究不仅发现了一种新的可以感染木本植物的病毒资源,扩充了植物病毒资源库,还进一步丰富了已知病毒可侵染宿主的范围,同时也部分奠定了植物病毒病防治的理论基础。2018年7月,在辽宁沈阳地区采集到了表象症状为黄色斑驳的桃叶卫矛疑似染病叶片。使用电子透镜技术观察到了大小约为500×13nm的线型病毒粒子。在后续实验中使用转录组测序技术与RT-PCR分子克隆技术在该样品分离物中扩增并得到一种Potexvirus属病毒。完整的病毒基因组长度为6,784个核苷酸(不包括poly(A)尾巴),其中包含5个开放阅读框(MK572000)。经分析得出结论,其与卫矛黄脉伴随病毒(EuYVAV,MF078061)同源性最高(41.0%);基于外壳蛋白(Coat protein,CP)基因的核苷酸和氨基酸序列,该病毒与兰属花叶病毒(Cymbidum mosaic virus,CyMV,EF125179)具有最高的序列相似性,分别为43.9%和38.8%。系统发育分析表明该病毒与Potexvirus属中的卫矛黄脉伴随病毒(EuYVAV)的同源性最高,属于系统发育的同一分支。通过对上述实验结果,认为该病毒是一个新病毒,隶属于甲型线性病毒科(Alphaflexiviridae)马铃薯X病毒属(Potexvirus),并且根据其染病后的外在表现性状将其命名为桃叶卫矛黄斑驳伴随病毒(Euonymus yellow mottle associated virus,EuYMaV)。这是继EuYVAV后又一例Potexvirus病毒感染桃叶卫矛植物。2016年6月,在辽宁省沈阳市采集到表现为皱缩症状的藜植物样本。使用转录组测序技术和RT-PCR分子克隆技术从病叶中扩增到一种豇豆花叶病毒科(Comovirinae)蚕豆病毒属(Fabavirus)病毒。该病毒的基因组由2条单链RNA分子组成,该病毒的RNA1全长基因组具有5,891个核苷酸,RNA2全长基因组具有3,549个核苷酸。为明确其属种分类,将辽宁沈阳的染病藜的分离物与其他已报道的病毒BBWV2进行了同源性和系统进化分析。同源性分析显示,基于该病毒CP基因的氨基酸序列进行同源性分析,发现该病毒与韩国益母草分离物BBWV2-[SK:Leonurus sibiricus](KM076649)同源性最高,为96.5%。根据Fabavirus的分类标准,认为该病毒是BBWV2的辽宁分离物。这是国际上首次报道藜科植物感染BBWV2。
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