论文部分内容阅读
第一部分“针刺灌流液”的作用机制目的:本文在去卵巢大鼠模型上,针刺处理一组特定穴位后,用推挽灌流技术收集正常大鼠性周期不同阶段下丘脑内侧视前区（MPOA）和针刺后去卵巢大鼠MPOA灌流液,并将其微量注射到去卵巢大鼠下丘脑MPOA,观察其产生的效应,以比较生理条件下神经内分泌信号传导通路和针刺处理后病理条件下信号传导通路的异同,探讨“针刺灌流液”的作用机制。材料和方法:采用切除双侧卵巢导致下丘脑-垂体-卵巢轴（HPOA）功能异常的大鼠模型（OVX）,连续三天给予电针“关元”为主的一组穴位处理,以电针后阴道脱落细胞重新出现和血E2水平明显降低作为针效的指标。用脑核团推挽灌流技术,收集电针后去卵巢大鼠下丘脑MPOA的推挽灌流液,简称针刺灌流液（AP）;另外,用推挽灌流技术,收集正常雌性大鼠性周期四个阶段的MPOA灌流液。将不同的灌流液分别微量注射到去卵巢大鼠的MPOA,观察它们各自对去卵巢大鼠阴道脱落细胞学和血雌二醇（E2）水平的影响;用放射免疫法（RIA）和高效液相法（HPLC）测定各组灌流液中GnRH、多巴胺（DA）、γ-氨基丁酸（GABA）、谷氨酸（Glu）、天冬氨酸（Asp）和β-内啡肽（β-EP）的含量。然后对各组灌流液中的这些物质量的变化进行比较分析。结果:正常性周期四个不同阶段的灌流液中的DA、GABA、Glu和β-EP等神经活性物质的含量都出现规律性的改变,其中动情期GABA的含量和β-EP的含量与GnRH释放量呈明显的负相关关系（r=-0.947,P<0.01;r=-0.797,P<0.05）;MPOA微量注射正常性周期四个阶段的灌流液后,去卵巢动物的阴道涂片脱落细胞和血E2水平,分别出现类似正常大鼠性周期四个阶段的特征变化;AP中DA、GABA、Glu和β-EP的含量相对恒定,其中GABA的含量与GnRH释放量也呈明显的负相关关系（r=0.978,P<0.05）。将AP微量注射到未经电针处理的去卵巢大鼠MPOA后,阴道涂片成熟脱落上皮细胞重新出现,血E2升高,出现了类似针刺样效应的变化。结论:正常性周期不同阶段下丘脑MPOA灌流液和针刺灌流液中携带的主要信息分子可能由一些经典神经递质、氨基酸类递质和神经肽等组成。这些信息分子承担着机体本身所固有的联系和调节神经-内分泌两大系统的信号传递;去卵巢大鼠MPOA的针刺灌流液可作为神经内分泌信号载体,把一个机体对HPOA调节信息传递给另一机体,为在离体组织或细胞上体现针刺效应,开展针刺信号传/转导的研究提供一种新的思路。第二部分针刺灌流液条件孵育下丘脑脑片对ERK、P38磷酸化的影响目的:AP条件孵育去卵巢大鼠下丘脑MPOA脑片,观察针刺灌流液对ERK、P38磷酸化和ERK/MAPK级联反应的影响,初步探讨针刺信号在GnRH神经元内外进行传/转导通路。材料和方法:在冰浴中,将卵巢大鼠下丘脑MPOA快速制成2-3mm厚的脑片,分别在人工脑脊液和针刺灌流液条件下孵育,收集孵育液,用RIA测定孵育液中GnRH释放量,脑片用于测定ERK1/2、p38磷酸化的表达。结果:AP条件孵育后,孵育液中GnRH释放量为82.07±14.7pg/ml,而人工脑脊液条件孵育后GnRH释放量为55.49+10.4pg/m,经AP条件孵育后,脑片释放GnRH被明显抑制了（P<0.05）;Western blot的结果表明,人工灌流液孵育的脑片pERK和tERK的相对光密度比值（relatively density）为0.2364±0.0313。AP条件孵育后的pERK和tERK的相对光密度比值（relatively density）为0.0744±0.01。两者相比,AP条件孵育后的去卵巢大鼠MPOA脑片ERK1/2磷酸化显著下调;人工灌流液条件孵育的脑片和AP条件孵育脑片后pP38和tP38的相对光密度比值（relatively density）分别为0.4374±0.0413,0.173±0.013,pP38和tP38的相对光密度比值也明显下降（P<0.05）。结论:去卵巢大鼠MPOA的针刺灌流液可能抑制了GnRH细胞内ERK1/2和p38的磷酸化,从而部分减弱了下丘脑GnRH细胞内信号转导通路的功能,可能在一定程度上抑制了细胞核内GnRH的合成,实现了针刺对去卵巢大鼠下丘脑释放GnRH的抑制效应。去卵巢大鼠的针刺灌流液携带有“针刺治病信息”,可作为一种“工具药”用于针刺治疗围绝经期综合征机制研究。