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涎腺腺样囊性癌(Salivary Adenoid Cystic Carcinoma,SACC)来源于上皮,约占涎腺肿瘤的11%,在涎腺恶性肿瘤中占24%,男女发病率未见明显差异性,好发年龄为40-60岁。SACC好发于小涎腺及大涎腺中较小的腺体,以腭腺、颌下腺和舌下腺多见,在腮腺肿瘤中仅占2%-3%。SACC对放化疗均不敏感,其主要的治疗方法仍然为手术治疗,SACC侵袭性强,易沿神经血管束向周围组织扩散转移,并可通过血运转移至肺、脑、骨、肝等组织,术后复发率为16%-85%,转移率为25%-55%,其中肺部转移率则高达70%-100%,所以患者的预后较差,术后生存率较低。口腔颌面部恶性肿瘤容易造成严重的面部畸形和口咽功能障碍,患者承受着心理和生理的莫大痛苦。目前的治疗方法主要以外科手术为主,放射治疗和化学药物治疗为其辅助治疗手段,三种手段各有特点,互为补充,其地位均无法被取代。越来越多的研究将三种方法有效的结合起来,发挥各自的优点,规避其缺点,最大程度的减轻患者的痛苦,避免肿物的复发和转移。化学药物疗法因其特殊性而得到研究者的青睐,由原来的细胞毒性药物的研究,逐步转向研究新型的抗肿瘤药物,以期在恶性肿瘤的治疗中掀开新的一页。植物激素是天然激素,也被称为植物内源激素,由植物自身代谢而产生。虽为简单的小分子有机化合物,但却能发挥较为独特的作用,在较低浓度下就能对植物及动物产生明显的影响。既往的研究主要集中在其对植物生长发育的影响方面,后来研究者发现某些植物激素对肿瘤细胞的生长和发育也会产生较为明显的影响,所以逐步将植物激素引入到对肿瘤的治疗上来。1942年,科学家发现了吲哚乙酸(Indole-acetic-acid,IAA)的抗肿瘤作用,遂将其从高等植物中分离出来,逐步开始了吲哚乙酸在恶性肿瘤领域的基础研究。IAA是一种植物生长激素,主要参与并调节植物细胞的分裂、分化、生长等过程。辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)含有激素,可以氧化吲哚乙酸,是特殊的植物过氧化物酶。关于吲哚乙酸和辣根过氧化物的研究始于1995年,越来越多的研究表明,IAA在人体内的耐受性较高,不易被哺乳类过氧化物酶氧化,只有在HRP存在时,IAA才会发生明显的氧化,并产生代谢产物,此代谢产物有毒性,但此毒性只对肿瘤细胞发生作用,对正常组织没有危害。本课题将从以下两个部分通过实验研究分别探讨IAA/HRP对人腺样囊性癌的作用,为腺样囊性癌的防治提供新的思路。第一部分:IAA/HRP对腺样囊性癌细胞生物学行为的影响目的:建立人腮腺腺样囊性癌系PACC-1561,同时采用人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-2细胞作为生物重复参考。通过对细胞增殖力、细胞周期分布和细胞凋亡等检测来观察IAA/HRP对SACC-2细胞和PACC-1561细胞生物学行为的影响。方法:采用CCK-8法检测指数生长期的细胞增殖情况,采用流式细胞仪分析细胞周期变化,按AnnexinV--PE Apoptosis Kit操作手册进行早期细胞凋亡的检测,利用RT-PCR检测核因子NF-κBp65 mRNA在腺样囊性癌细胞中的表达,蛋白免疫印迹检测各组细胞中c-Myb蛋白的表达情况。结果:IAA/HRP抑制细胞增长,与对照组相比差异显著(P<0.01);流式细胞仪分析结果显示IAA/HRP组细胞周期阻滞在G0-G1期;流式细胞仪检测实验组与对照组细胞的AnnexinV-PE水平,实验组细胞的凋亡率明显升高;腺样囊性癌细胞NF-κBp65mRNA在实验组中的相对表达量明显低于正常对照组,差异有统计学意义,与阳性对照组5-Fu相比,未见明显差异性;IAA/HRP作用于细胞后,上调抑癌基因Bax蛋白的表达,下调c-Myb蛋白的表达。第二部分:IAA/HRP对裸鼠腺样囊性癌细胞移植瘤生长抑制作用的实验研究目的:进一步探讨IAA/HRP对裸鼠腺样囊性癌细胞移植瘤生长的抑制作用。方法:建立腺样囊性癌SACC-2和PACC-1561荷瘤裸鼠模型,将荷瘤裸鼠随机分为3组,每组8只:空白对照组、5-Fu阳性对照组和IAA/HRP实验组。第27天处死裸鼠后,称重瘤体并计算抑瘤率,解剖裸鼠内脏,采用HE染色,观察药物对各个脏器是否存在毒副作用;通过蛋白免疫印迹检测各组肿瘤组织中Survivin蛋白的表达情况;实时荧光定量检测MMP-2、MMP-9mRNA表达水平。结果:IAA/HRP组瘤重显著低于生理盐水组,与5Fu组无明显差异;实验结束后5Fu组裸鼠体重与生理盐水组裸鼠体重相比有显著性差异,与IAA/HRP组裸鼠体重相比有显著性差异,生理盐水组与IAA/HRP组未见明显差异;HE染色显示IAA/HRP在短期内应用不会对裸鼠内脏器官产生毒副作用;蛋白免疫印迹法显示Survivin条带密度减小,与5-Fu表达相似;实时荧光定量检测MMP-2、MMP-9在实验组中的相对表达量明显低于正常对照组,差异有统计学意义。结论:1.IAA/HRP能有效抑制癌细胞生长,将细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制细胞进入增殖周期,诱导癌细胞提早凋亡。并推测出抑制作用最强的时间为48h,有效抑制浓度为:60μmol/LIAA和1.2mg/LHRP。2.IAA/HRP使NF-κBp65阳性表达明显下调,且与5-FU组没有显著差异;同时IAA/HRP可下调c-Myb蛋白的表达。3.IAA/HRP对腺样囊性癌荷瘤裸鼠有抑瘤作用,能够抑制肿瘤生长;IAA/HRP短期内对腺样囊性癌荷瘤裸鼠的体重及内脏无明显影响。4.IAA/HRP可以抑制MMP-2、MMP-9和Survivin的活性,阻止癌细胞的转移和浸润。