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CD45是广泛表达在有核造血干细胞表面的跨膜糖蛋白,也称之为白细胞表面共同抗原,其胞浆内存在着具有蛋白酪氨酸磷酸酶活性的结构,可通过改变Src家族蛋白酪氨酸激酶结构从而调节蛋白酪氨酸激酶的活性,在淋巴细胞的增殖、成熟、分化、细胞信号转导、细胞粘附等过程中发挥作用。此外,编码其胞外部分的外显子的选择性剪切形成的变构体依据淋巴细胞不同发育阶段、活化状态的差异选择性表达在细胞表面,为划分淋巴细胞的不同分化时期起到了重要的标记作用。目前,利用CD45分子及其变构体的在造血细胞上表达的差异作为研究免疫系统疾病的切入点,在疾病的预防、早期诊断、治疗等方面已取得了一定的进展。但是,在低等脊椎动物中有关于CD45基因的基础研究还未深入展开。
日本七鳃鳗是现存最古老的无颌类脊椎动物之一,是无脊椎动物向脊椎动物进化过程中的重要的桥梁。将七鳃鳗作为研究脊椎动物适应性免疫系统演化的模式动物,对于揭示脊椎动物适应性免疫系统的起源和进化具有深远的意义。CD45是重要的免疫因子,它通过调节蛋白激酶的活性从而在适应性免疫系统应答过程中发挥重要的作用。
本文对日本七鳃鳗的白细胞cDNA文库中搜索后发现一条有意义的CD45 EST序列,经过与其他物种的CD45比对后发现它们胞浆内结构存在着较高的同源性。随后,从基因的保守区域开始自行设计引物,通过使用3RACE和RT-PCR的方法,最终成功地克隆到CD45基因的cDNA全长。
为了探寻与日本七鳃鳗中类淋巴细胞增殖、成熟、分化相关的免疫组织。我们利用实时定量PCR的方法检测了不同抗原刺激前后五个组织器官CD45基因表达水平的变化。在使用LPS、ConA抗原刺激日本七鳃鳗后,在五个被检测的组织器官中,基因表达量都有不同程度的上调,其中基因表达量变化明显的组织器官是鳃、心脏、白细胞。分析后得知,而基因表达量的上调可能暗示着这些组织与日本七鳃鳗的类淋巴细胞的增殖、分化过程密切相关。此外,还利用生物信息技术对其理化性质,蛋白质高级结构、物种间基因同源性、基因系统发生树等方面进行了分析和预测。