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由于集约化养殖的高度发展,饲养管理不规范,例如环境风险因素不好控制、高脂高蛋白或霉变饲料的使用,以及抗生素的滥用和用药不规范等均可使动物所面临的肝损伤风险大大增加,导致动物肝细胞损伤坏死,肝组织病变,肝功能下降,最终导致动物的死亡。临床可见动物可视粘膜、皮肤发黄、呕吐、脘腹胀满、腹水、小便短黄、大便不爽或秘结。按中兽医辨证该疾病由湿热毒邪入侵,致湿热内蕴肝胆。应以保肝退黄、清热解毒为治疗原则。赶黄草(Penthorum chinense Pursh,Pc P)是我国一味传统苗药,具有清热解毒、祛瘀除湿、保肝健脾的功效。前期研究表明赶黄草提取液对四氯化碳(CCl4)致犬急性肝损伤(AHI)、黄曲霉毒素B1(AFB1)致鸡肝损伤有较好的治疗效果及抗氧化抗炎作用。因此自拟赶黄草复方(Penthorum chinense Pursh compound,PCPC)通过建立大鼠肝胆湿热模型,探讨其治疗大鼠肝胆湿热效果及作用机制,为畜禽临床用药提供理论基础。1、探究了PCPC对肝胆湿热模型大鼠的治疗效果。通过“二甲基亚硝胺(DMN)+高温高湿环境”的方法建立大鼠肝胆湿热模型;试验分为空白组、模型组、赶黄草复方高剂量组(PCPC-H)、赶黄草复方中剂量组(PCPC-M)、赶黄草复方低剂量组(PCPC-L)、茵陈蒿汤组(Yin Chen Hao Tang,YCHT)六组,药物治疗肝胆湿热大鼠并观察。结果显示,空白组大鼠被毛光亮,精神良好,饮食正常,体态健康,体温、粪便、尿液、腹围与体色情况均正常;模型组大鼠出现精神倦滞、被毛粗糙、饮食下降、可视黏膜及皮肤黄染、尿液短黄、大便燥结、腹部胀满等症状。给药14 d后,大鼠精神状态、采食、饮水和体温基本恢复正常,可视黏膜及皮肤颜色基本恢复正常。各药物组有效率均为100%,PCPC-H、PCPC-M痊愈率为100%,PCPC-L痊愈率为75%。2、探索了PCPC对肝胆湿热大鼠血清肝功能指标及肝组织病理学的影响。通过全自动生化分析仪检测血清谷丙转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)水平,苏木精伊红(HE)和马森三色(Masson)染色制作大鼠肝脏组织切片并观察。与空白组相比,模型组大鼠血清ALT、AST、ALP、TBIL升高,肝细胞大量坏死,肝索排列紊乱,肝小叶破坏,有白色坏死灶,有大量炎性细胞浸润,肝脏组织胶原沉积增多,纤维间隔明显。同模型组相比,PCPC治疗后大鼠血清ALT、AST、ALP、TBIL下降,肝组织形态明显改善,受损肝细胞数量、炎性浸润、纤维增生明显减少。说明PCPC有效减轻肝胆湿热大鼠肝损伤,逆转肝纤维化的进展。3、探索了PCPC对肝胆湿热大鼠血清炎性因子及氧化应激水平的影响。采用ELISA法分别检测了大鼠血清白介素-1β(IL-1β)、白介素-18(IL-18)、白介素-6(IL-6)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的的水平。结果显示,与空白组相比,肝胆湿热模型大鼠血清中SOD、GSH活性显著降低,差异极显著(P<0.01);IL-1β、IL-6、IL-18和MDA含量升高,IL-1β、IL-6、IL-18差异极显著(P<0.01),MDA差异显著(P<0.05);与模型组相比,PCPC-H和YCHT大鼠血清SOD、GSH活性均升高,MDA含量降低,差异极显著(P<0.01);PCPC-M、PCPC-L大鼠血清SOD、GSH活性均升高,差异显著(P<0.05)。PCPC各剂量组大鼠血清IL-1β、IL-6、IL-18极显著下降(P<0.01)。说明PCPC有效降低肝胆湿热大鼠炎症水平,减少氧化应激,提高机体抗氧化水平。4、探索了PCPC对肝胆湿热大鼠肝脏组织巨噬细胞激活以及肝星状细胞(HSC)活化的影响。采用免疫组化检测大鼠肝脏巨噬细胞CD68及肝星状细胞α-SMA阳性表达。结果显示,与空白组相比,肝胆湿热模型组大鼠肝脏CD68和α-SMA阳性表达显著升高,肝窦、纤维间隔及汇管区均呈现强阳性表达,与模型组相比,PCPC各剂量组和YCHT大鼠肝脏组织CD68表达明显较少;α-SMA表达明显减弱。说明PCPC能够有效减少肝脏组织CD68和α-SMA的阳性表达,抑制巨噬细胞激活和HSC活化,改善肝脏微环境,减轻大鼠炎症反应及纤维化损伤。5、探索了PCPC对肝胆湿热大鼠肝组织NF-κB、NLRP3炎性小体的影响。Western Blot法检测肝脏磷酸化核因子NF-κB-p65亚基(p-p65)、胱天蛋白酶1(Caspase-1)蛋白相对表达量,q RT-PCR法检测肝脏核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、Caspase-1、凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)m RNA转录量。结果显示,与空白组相比,模型组大鼠肝组织中磷酸化核因子p-p65、Caspase-1蛋白相对表达量均明显升高,NLRP3、Caspase-1、ASC m RNA转录量升高,差异极显著(P<0.01),与模型组相比,PCPC能有效降低肝组织中p-p65、Caspase-1蛋白相对表达量以及NLRP3、Caspase-1、ASC m RNA转录量。说明PCPC能够有效抑制NF-κB信号通路激活和NLRP3炎性小体活化,从而减轻大鼠炎症反应及纤维化损伤。综上所述,PCPC对肝胆湿热大鼠有良好的治疗效果。其作用机理可能是通过减少巨噬细胞激活,抑制肝星状细胞活化,及调节NF-κB/NLRP3信号通路中相应的蛋白表达而发挥作用改善肝脏微环境,提高机体抗氧化酶SOD及GSH的活性,抑制过氧化产物MDA的大量产生,降低炎症因子IL-1β、IL-6和IL-18的含量而起作用的。