背景与目的 急性白血病是血液肿瘤中最常见的疾病之一。随着生命科学研究的不断发展，治疗白血病的方法不断进展。药物的化疗，分子靶向治疗，造血干细胞移植等联合治疗使治疗效果不断提高。目前造血干细胞移植被认为是治愈急性白血病唯一有效的方法，但是存在HLA相合配型难及费用昂贵等问题，药物的化疗仍是急性白血病治疗的主要手段。经标准的化疗方案治疗后约有20％的初发患者不能获得完全缓解，有60％左右的患者在完全缓解后复发，白血病细胞的原发及继发耐药是白血病化疗失败的主要原因之一。因此提高白血病细胞对化疗药物敏感性是治愈急性白血病的关键。 正常细胞在内外因子的调节下有序的循着细胞周期不断分裂增生及凋亡，保持动态平衡。肿瘤细胞的增殖平衡失调，细胞出现无限制的增殖和凋亡减慢。细胞失控性增生对肿瘤的发生发展有重要的意义。S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated：protein 2，SKP2)是一个与细胞周期调控密切相关的基因，属癌基因，参与调控抑癌基因P27的表达。P27为Cip/Kip家族(CDK-interacting protein/kinase inhibition protein)中的一员，是细胞周期的负性调控因子，能阻滞细胞周期于G0/G1期。SKP2、P27通过影响白血病细胞的增殖、分化、凋亡参与白血病疾病的进程和预后。 SKP2、P27与白血病耐药的研究尚存在争议。通过检测临床白血病患者骨髓细胞SKP2、P27的表达发现，SKP2、P27的表达与患者的预后、对化疗药物的敏感性、完全缓解率有关，SKP2高表达或P27低表达的患者预后不良，P27的表达水平高，患者化疗的缓解率高。但细胞周期的停滞有可能使白血病细胞对细胞周期依赖性的化疗药物更加不敏感。目前为止，有关降低癌基因SKP2的表达影响白血病耐药的机制尚不明确。 本实验对敏感细胞株HL-60和耐药细胞株HL-60/A的细胞周期调控因子SKP2、P27kipl进行检测，探讨SKP2、P27kipl在白血病细胞中的表达与耐药、预后的关系；设计合成具有良好沉默效应的SKP2siRNA，研究SKP2基因水平下调后，白血病耐药细胞株HL-60/A中P27、MRP的表达情况，HL-60/A耐药性的变化，初步探讨下调SKP2基因表达对白血病耐药的影响。 结论 1 HL-60/A细胞对多种化疗药物耐药，其多药耐药的发生与MRP蛋白的过度表达有关。 2 耐药细胞株HL-60/A中SKP2的表达高于敏感细胞株HL-60，而P27的表达低于后者。SKP2在耐药细胞中过度表达，可能成为逆转白血病耐药的一个潜在的分子靶点。 3 HL60/A细胞处于细胞周期中G0/G1期的细胞比例减少，与细胞P27表达水平减低有关。 4 以SKP2基因mRNA为靶点设计合成的siRNA能下调SKP2 mRNA和蛋白质水平的表达，这种作用具有高度的特异性。 5 体外合成的siRNA转染细胞，其作用是瞬时性的，持续时间24～48h左右。 6 RNA干扰SKP2基因可上调P27kipl蛋白的表达，但对P27mRNA的表达无影响，SKP2对P27的调节发生在转录后水平。 7 RNA干扰SKP2基因可阻滞细胞周期于G0/G1期，细胞周期的停滞可能与P27表达增加有关。 8 RNA干扰SKP2基因后细胞MRP蛋白和mRNA的表达均下降，耐药白血病细胞对多种化疗药物的敏感性增加。