人粒细胞无形体病(Human anaplasmosis，HA)是嗜吞噬细胞无形体(Anaplasmaphagocytophilum，以下简称AP)经蜱虫传播的一种新发人兽共患疾病，临床表现主要为不适、发热、肌痛和头痛等，并伴有白细胞和血小板减少症和转氨酶升高。它可以引起人感染粒细胞无形体病和反刍动物蜱传热。1994年美国的威斯康辛州首次报道该病例。HA的临床早期症状和体征是非特异性的，通常与病毒性疾病相似，容易误诊，严重者可导致死亡。
　　2015年在中国发现了一种新型无形体：山羊无形体(Anaplasmacapra，以下简称AC)，且从病人身上成功分离出该病原体。此外，在山东胶南地区的长角血蜱中检测出了AC。随后的研究中，我国在多个省份的山羊和绵羊中检测出AC无形体，患病率为13.7%，在其检测的12个省份中有7个省份的AC检测结果阳性，还有研究报道称山羊的发病率高于绵羊的发病率，综上说明该新型无形体在我国广泛分布。在国外的研究报道中，韩国在牛(0.4%)和其本地山羊体(17.9%)内均检测出了AC。Anaplasmacapra可以在人类细胞系中进行培养(HL-60，THP-1)。尽管所有的无形体种类都能感染来自骨髓前体的外周血细胞，由于AC与其他无形体物种在基因上来说是不同的，它似乎与那些感染哺乳动物红细胞的物种关系更加密切。
　　目前诊断这两种人畜共患病原体的方法主要依据PCR技术和间接免疫荧光实验(IFA)等方法，但是这些方法成本、技术和实验条件要求都高，且免疫荧光存在主观性强和结果不可靠等缺点。本研究旨在构建AC和AP两种无形体msp2抗原基因进行原核表达和纯化，经Westernblot验证蛋白的免疫反应性和两种无形体蛋白之间的交叉反应性，为进一步研制出无形体病早期快速检测、简便特异临床诊断提供一定的理论基础。
　　目的：
　　通过原核表达系统，对AC和AP两种无形体MSP2蛋白表达和纯化，研究两种无形体MSP2蛋白的免疫反应性和两个无形体蛋白之间的交叉反应性，为两种人兽共患无形体病的快速检测、减少疾病误诊等方面提供一定的科学和技术依据。
　　方法：
　　1.AC和APmsp2基因扩增
　　我们提取APMRK株的DNA，以其为模板扩增AP的msp2基因；从本实验室收集的AC阳性的两个长角血蜱提取的DNA，以它们作为模板扩增AC的msp2基因。
　　2.AC和APMSP2蛋白表达及纯化
　　对AC和AP的msp2基因的序列进行生物信息学分析，在去除信号肽的基础上，选取两种无形体msp2富含抗原表位区的序列进行克隆、表达和蛋白纯化。
　　3.AC和APMSP2蛋白免疫反应性及蛋白之间的交叉反应性
　　间接免疫荧光试验利用标准试剂盒筛选APIgG抗体阳性人血清和阴性血清，将筛选血清作为一抗，同时设置GST标签蛋白作为对照组，Westernblot鉴定AC和APMSP2融合蛋白的免疫反应性以及蛋白之间的交叉反应性。
　　结果：
　　1.成功构建AC-1、AC-2和APMSP2蛋白的重组原核表达质粒pGEX-KG-AC-1-FLAG、pGEX-KG-AC-2-FLAG和pGEX-KG-AP-HA；用GST亲和柱成功纯化了E.coli表达重组MSP2蛋白。
　　2.APIgG抗体阴性人血清与APMSP2蛋白和GST标签蛋白均不发生反应；APIgG抗体阳性人血清与APMSP2蛋白发生特异性反应，与对照GST标签蛋白不反应。
　　3.AC-1和AC-2MSP2蛋白能与APIgG抗体阳性人血清发生交叉反应。
　　结论：
　　我们成功表达和纯化了AC-1、AC-2和APMSP2蛋白；经Westernblot验证蛋白具有免疫反应性；AP重组蛋白可以与APIgG抗体阳性人血清发生特异反应，AC重组蛋白亦可以与APIgG抗体阳性人血清发生交叉反应，说明MSP2蛋白可以诊断AC和AP感染，但不能分类诊断。