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紫茎泽兰(Eupatorium adenophorum Spreng)是我国公布的第一批外来入侵物种名单中名列首位的恶性杂草。目前,在云南、贵州、四川、重庆等地区严重发生并造成极大危害,十分迫切需要对该杂草进行防控。本研究从生物防治角度出发,从紫茎泽兰和菊科其它植物发病部位上分离和筛选对紫茎泽兰有致病性的生防菌,并对生防菌的应用技术进行了初步研究。主要研究结果如下:
1、通过常规组织分离法,对采自云南和四川等地的紫茎泽兰病害标本进行了分离和培养,共获得150个真菌菌株和30个细菌菌株。通过室内致病性测定,筛选出对紫茎泽兰离体叶片有较强致病性的真菌菌株3株,并通过比较形态学和ITS序列测定,分别将3个菌株鉴定为链格孢菌[Alternaria alternata(Fr.) Keissler]、灰葡萄孢霉(Botrytis cinerea Pers.)和高粱茎点霉(Phoma sorghina Sacc.)。其中,B.cineea KM10和P.sorghina PZH17的培养滤液对紫茎泽兰离体叶片和活体叶片均具有较强的致病性,且其培养滤液高温处理后致病性不变。没有筛选到对紫茎泽兰离体叶片有致病性的细菌菌株。
2、为获得更多的生防菌源,同时在广州地区对菊科植物的病害标本进行了较广泛采集和病原菌的分离,共获得了120株真菌菌株和20株细菌菌株。通过对紫茎泽兰离体叶片的致病性测定,筛选出2株有较好致病性的细菌菌株,编号分别为FC6和JB5,经16SrDNA序列测定,将2个菌株鉴定为Pectobacterium carotovorum subsp.carotovorum Jones。只筛选到1株对紫茎泽兰有一定致病性的真菌菌株,但其培养滤液没有致病性。
3、采用平板对峙培养的方法进行了亲和性测定,结果表明,B.cinerea KM10、P sorghina PZH17和细菌菌株Pcc FC6两两或三者之间分别不存在拮抗作用或拮抗作用不明显,相互间具有亲和性。
4、对Bcinerea KM10和P.sorghina PZH17生防菌株分别进行了产毒素条件的研究,结果显示,B,cinerea KM10的最佳产毒培养条件为:马铃薯葡萄糖培养液、pH6.7、25℃、光暗交替和静置培养11-17 d;Psorghina PZH17的最佳产毒培养条件为:胡萝卜葡萄糖培养液或马铃薯葡萄糖培养液、pH6.7、25-30℃、黑暗和静置培养9d。
5、为了测试具有亲和性的复合生防菌间有无增效作用,采用喷雾接种的方法对紫茎泽兰活体叶片进行接种。结果显示,3株生防菌间两两或三者复合后接种没有增效作用。
6、为明确候选生防菌的生物安全性,选取了禾本科的玉米和水稻、茄科的番茄和辣椒、十字花科的小白菜、豆科的大豆和豌豆、菊科的鬼针草和蟛蜞菊等植物叶片作为接种材料。细菌菌株Pcc FC6的菌液在微伤口接种时能侵染所有供试植物的叶片,而无伤口接种则不能侵染。B.cinerea KM10和P.sorghina PZH17的菌丝块接种均可导致供试植物的叶片发病,而B.cinerea KM10的培养滤液在微伤口接种时不能侵染水稻和蟛蜞菊,在无伤口接种时仅对小白菜叶片造成病斑,P.sorghina PZH17的培养滤液在微伤口接种时能侵染全部供试植物的叶片,而在无伤口接种时仅对玉米和鬼针草的叶片造成病斑。