凝胶制剂是近年来新兴的一种药物新剂型,由于其具有良好的生物相容性,局部给药后具有吸收好、稳定性较好、不污染衣物,对药物释放具有控释、缓释作用等特点,并得到广泛的应用。为保证药物的安全性和有效性,关键在于质量控制的研究。由于凝胶制剂在制备过程中会使用大量的高分子药用辅料,其存在不仅干扰小分子活性物质的分析测定,而且增加了其质量表征的困难性。因此,样品前处理工作中表征凝胶剂中的小分子活性物质的含量是的一个急待解决的难题并引起众多研究者的关注,并为些做出的较多的尝试。目前,凝胶制剂的样品前处理方法主要包括凝胶渗透法、有机溶剂提取法和离心沉淀法。然而这些方法操作过程耗时而且繁琐,但分离效果并不理想,分析的准确性和可靠性也不高。超滤法是目前通常使用的样品前处理手段,其主要是在压力的作用下,截留大分子,使小分子通过超滤膜,从而实现大分子和小分子物质的分离。传统的超滤法采用的都是平膜过滤,在离心超滤过程中易产生浓差极化现象,进而导致膜渗流量和分离效率降低,影响分析的准确度。中空纤维超滤法(HFCF-UF)是一种新型的超滤技术,其克服了传统超滤法的浓差极化现象,大大提高了分离效率。HFCF-UF已经成功的应用于药物制剂和生物体液中小分子活性物质的分离,展现了其在复杂基质中分离小分子物质的前景,然而在凝胶这种复杂机制中的应用未见报道。为了保证凝胶制剂中有效成分的准确定量,研究和开发一种简单、适宜其日常质量控制的前处理方法是研究者面临的重要课题,也是保证凝胶制剂未来开发与应用的关键问题。本课题以酮洛芬凝胶和氧氟沙星凝胶为代表,通过考察中空纤维对药物的吸附性和凝胶制剂稀释剂的选择,对凝胶制剂质量控制与质量表征关键技术的研究。研究结果表明HFCF-UF前处理方法用于凝胶制剂中小分子物质的分析,具有高效、简便、快速的优点,克服了传统方法的操作繁琐、分离效果不理想等缺点,为含有高分子辅料的凝胶制剂中小分子的表征提供了一个可靠的分析平台。第一部分中空纤维超滤法-高效液相色谱法测定酮洛芬凝胶中主药的含量目的:考察不同中空纤维膜对酮洛芬的吸附情况和酮洛芬凝胶稀释剂的选择,建立了利用中空纤维超滤技术进行凝胶类制剂的样品前处理方法,并结合高效液相色谱法对酮洛芬凝胶中主药的含量进行分析。方法:首先选取了两种不同膜材(聚偏氟乙烯、聚砜)进行吸附性考察。在进行凝胶稀释剂(水、甲醇)的选择,建立了HFCF-UF对样品的分离纯化方法,分离纯化条件:取适量供试品溶液约9 m L于HFCF-UF装置中,在4000 r/min离心15 min,取出中空纤维,收集腔内溶液,直接进行高效液相色谱法分析。色谱条件:phenomenexc®C18柱(250×4.60 mm);流动相:0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节p H值至3.5):甲醇=(25:75);流速:1.0 m L·min-1;柱温为室温;检测波长:255 nm;进样量:20μL。结果:凝胶样品在经过HFCF-UF装置中,能将小分子活性成分与高分子辅料有效分离,离心后的滤液可直接进行色谱分析。采用2种中空纤维膜均可获得满意的回收率结果,对酮洛芬无吸附作用。采用甲醇作为稀释剂时回收率达100%。方法研究结果表明,酮洛芬在0.26-10.2μg·m L-1范围内线性关系良好;酮洛芬平均回收率分别为:101.1%(RSD=1.3%),102.6%(RSD=1.5%),100.8%(RSD=1.6%);外标法计算样品中酮洛芬含量分别为样品标示量的100.5%、99.8%、99.7%。结论:HFCF-UF用于酮洛芬凝胶前处理,获得超滤液可直接进行分析。该法具有高效、简便、快速,克服了传统方法的操作繁琐、分离效果不理想等缺点,为含有高分子辅料的凝胶制剂中小分子的表征提供了一个可靠的分析平台。第二部分中空纤维超滤法-高效液相色谱法测定氧氟沙星凝胶中主药的含量目的:考察凝胶样品浓度对氧氟沙星回收率的影响、中空纤维膜对氧氟沙星的吸附情况和凝胶稀释剂的选择,建立了利用中空纤维超滤技术进行凝胶类制剂的样品前处理方法,并结合高效液相色谱法方法对氧氟沙星凝胶中主药的含量进行分析。方法:首先选取了两种不同膜材(聚偏氟乙烯、聚砜)进行吸附性考察。在进行凝胶稀释剂(水、甲醇、盐酸水溶液)的选择。首先称取供试品0.1 g、1 g于10 m L容量瓶中,加入1 m L的0.1 mol·L-1盐酸溶液,溶解,用水稀释至刻度,制备不同浓度凝胶供试品。采用HFCF-UF对样品经行分离纯化,分离纯化条件:HFCF-UF装置在4000 r/min离心15 min,取出中空纤维,弃去第一次超滤液后,将中空纤维再次放入样品溶液中进行二次超滤,收集腔内溶液,用流动相稀释适当倍数,直接进行高效液相色谱法分析。色谱条件:Promosil C18柱(150×4.60 mm);流动相:甲醇:水=(30:70,含0.5%的三乙胺,用磷酸调节p H值至4.0);流速:1.0 m L·min-1;柱温为室温;检测波长:293 nm;进样量:20μL。结果:利用中空纤维超滤技术,可有效分离出氧氟沙星凝胶中小分子活性成分,滤液可直接进行色谱分析。高浓度凝胶样品对回收率影响较小,加大样品量,尽量减少对样品的稀释作用,避免了样品失真对回收率的影响。2种中空纤维都存在吸附问题,通过二次超滤法以达到膜吸附饱和解决了中空纤维膜的吸附问题,回收率满足要求。氧氟沙星在5.10-51.0μg·m L-1范围内线性关系良好;氧氟沙星平均回收率分别为:101.1%(RSD=1.7%),9.9%(RSD=0.8%),100.3%(RSD=0.9%);外标法计算样品中氧氟沙星含量分别为样品标示量的101.5%、100.4%、99.6%。结论:HFCF-UF用于氧氟沙星凝胶前处理,获得的二次超滤液可直接进行分析。该法具有高效、简便、快速,克服了传统方法的操作繁琐、分离效果不理想等缺点,为含有高分子辅料的凝胶制剂中小分子的表征提供了一个可靠的分析平台。