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肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,在我国肝癌导致的死亡仅次于肺癌,居第二位。虽然临床上使用的抗肿瘤药多柔比星(doxorubicin,DOX)、长春(vincristine,VCR)、紫杉醇(paclitaxel)等具有较好的疗效,但长期持续使用这些药物极易产生肿瘤多药耐药(multidrug resistance,MDR)。据美国临床肿瘤学会(ASCO)统计,90%以上肿瘤患者死亡原因或多或少与肿瘤MDR有关,其中ATP结合盒(ATP binding casssette,ABC)转运蛋白过表达是引起MDR的主要原因。目前为止,还没有耐药逆转剂被美国食品药品监督管理局(FDA)批准上市,因此从传统中药中寻找高效、低毒的耐药逆转剂是当前研究的热点。灵芝烯酸B(Ganoderenic acid B,GAB)是从传统中药灵芝中分离得到的羊毛甾烷型三萜化合物,已经发现GAB对多种肿瘤细胞均具有杀伤作用,但是,其杀伤肿瘤细胞的作用机理还没有研究清楚。目前为止,尚未见GAB在逆转肿瘤MDR方面的报道。本研究发现了GAB可以显著逆转ABCB1介导的肿瘤MDR,并揭示了其逆转MDR的作用机理。目的:评价GAB逆转肿瘤MDR的活性并揭示其作用机制,为将GAB发展成为MDR逆转剂先导化合物提供科学依据。方法：1)采用MTT法初步筛选和评价灵芝提取分离单体的耐药逆转活性;(2)采用MTT法评价GAB对Hep G2和MCF-7细胞及对应的耐药性细胞Hep G2/ADM和MCF-7/ADR的增殖抑制作用,确定其非毒剂量;(3)采用MTT法对GAB逆转肿瘤耐药细胞Hep G2/ADM和MCF-7/ADR的活性进行评价,并以敏感细胞株Hep G2和MCF-7作为对比;(4)使用荧光酶标仪评价GAB对罗丹明-123(rhodamine-123,Rhm-123)在Hep G2/ADM细胞内累积的影响;(5)采用si RNA干扰ABCB表达确认GAB逆转作用是否依赖于ABCB1的表达水平;(6)采用Western blot法检测GAB对ABCB1蛋白表达水平响;(7)使用Pgp-GloTM ATPase试剂盒检测GAB对ABCB1 ATPase活性的影响;(8)采用MTT法评价GAB逆转作用的持续性;(9)采用Docking分子对接模型模拟分析GAB与ABCB1分子的对接方式和结合位点;(10)使用P450-GloTM screening systems试剂盒检测GAB对CYP3A4酶活性的影响。结果：(1)初步筛选和评价发现GAB具有较好逆转肿瘤耐药的活性;(2)GAB(10μM)对肿瘤细胞Hep G2/ADM和MCF-7/ADR及其对应的敏感细胞株Hep G2和MCF-7均没有明显的抑制作用,因此采用10μM和5μM作为检测浓度;(3)GAB可显著增加DOX、VCR和Paclitaxel在耐药细胞Hep G2/ADM上的敏感性,但对于敏感细胞Hep G2没有明显的影响,此外,GAB并不影响顺铂(Cisplatin)在Hep G2/ADM和Hep G2细胞上的敏感性;(4)GAB可促进Rhm-123在耐药细胞Hep G2/ADM中的累积,并且抑制Rhm-123的外排;(5)GAB的逆转作用依赖于ABCB1的表达水平;(6)但是,GAB既对ABCB1蛋白的表达没有明显的影响;(7)也对ABCB1 ATPase活性没有显著影响;(8)GAB的逆转作用不具有持续性;(9)GAB和VRP与ABCB1分子的结合位置不重叠;(10)GAB不影响CYP3A4酶的活性。结论：GAB可显著地逆转ABCB1介导的肿瘤MDR;GAB可促进ABCB1底物在耐药细胞的累积,但不影响ABCB1的表达和ABCB1 ATPase的活性,而是通过影响ABCB1转运功能,逆转肿瘤MDR。