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目的:通过筛选并鉴定(肌)营养不良短小蛋白结合蛋白1(dystrobrevin binding protein1,dysbindin-1)在睾丸组织中的相互作用蛋白,研究dysbindin-1在睾丸中的可能功能。方法:在Rosetta(DE3)菌种中诱导表达可溶性GST-dysbindin-1融合蛋白,经谷胱甘肽-琼脂糖珠亲和纯化后,与小鼠的睾丸组织蛋白孵育进行GST pull-down实验,通过液相色谱串联质谱(LC MS/MS)分析筛选dysbindin-1在睾丸组织中的相互作用蛋白。利用BioGPS数据库聚类睾丸组织中高表达和特异性表达的互作蛋白,运用DAVID6.8在线分析工具从细胞组分、分子功能、生物学过程和京都基因与基因组百科全书通路等方面对筛选出的互作蛋白进行GO(gene ontology)富集分析。选择我们感兴趣的潜在互作蛋白囊泡分选蛋白4A(vacuolar protein sorting 4A,vps4a),通过分子克隆技术构建原核和真核表达载体,运用GST pull-down、免疫共沉淀等实验,验证dysbindin-1与vps4a的互作关系。结果:1.本实验共筛选出108个dysbindin-1在睾丸组织中的潜在互作蛋白,其中98个为尚未报道的dysbindin-1互作蛋白,7个为睾丸高表达蛋白,5个为睾丸特异性表达蛋白。2.DAVID 6.8在线分析工具GO富集分析发现:这些候选蛋白主要分布在细胞质、细胞核、细胞膜、细胞外泌体等细胞组分中,通过与蛋白质、核酸等分子结合参与蛋白翻译和转运、囊泡运输及凋亡等生物学过程以及氨基酸生物合成、溶酶体及蛋白酶体等生物学通路。3.通过GST pull-down和免疫共沉淀实验证实dysbindin-1和vps4a存在相互作用。结论:Dysbindin-1在小鼠睾丸组织中与多种蛋白相互作用,可能参与精子发生和受精等生物学过程。