【摘 要】
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犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)引起的一种高度接触性传染病。犬细小病毒属细小病毒科,细小病毒属。该病毒于1978年首次发现。该病毒可引起幼犬严重的肠
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犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)引起的一种高度接触性传染病。犬细小病毒属细小病毒科,细小病毒属。该病毒于1978年首次发现。该病毒可引起幼犬严重的肠炎,引起新生犬心肌炎。人们研究证明犬细小病毒编码的VP2蛋白是该病毒主要抗原蛋白。研究证实由VP2基因制备的DNA疫苗能够刺激机体产生免疫应答反应。为提高VP2 DNA疫苗的免疫原性,本实验在小鼠体内尝试了利用犬白细胞介素2(cIL-2)基因增强VP2 DNA疫苗免疫应答的研究。通过RT-PCR方法从犬脾淋巴细胞中分别扩增含终止密码子和不含终止密码子的cIL-2 cDNA基因,然后将基因插入到真核表达载体pcDNA3.1中,分别构建成非融合的和与Myc/His融合的cIL-2基因真核分泌型表达载体,pcDNA-cIL-2和pcDNA-cIL-2/MH。将pcDNA-cIL-2/MH表达载体通过磷酸钙方法转染HEK 293FT细胞进行瞬时表达,以确定构建的表达载体能否介导cIL-2在真核细胞中进行分泌表达。然后用VP2表达载体(pcDNA-CD5sp-VP2,本室构建)单注射和VP2/IL-2表达载体共注射对小鼠进行免疫(用pcDNA3.1载体作为阴性对照)。免疫后通过ELISA方法检测免疫后不同时期小鼠血清VP2的抗体水平,并通过细胞增殖实验检测免疫后小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应,用ELISA方法测定小鼠淋巴细胞γ干扰素的表达水平。实验结果表明,本实验扩增的小鼠cIL-2基因与GenBank的参考序列一致,构建的cIL-2表达载体能够介导重组cIL-2在HEK293FT细胞中进行分泌表达。免疫结果显示,利用cIL-2/VP2表达载体共免疫小鼠,免疫后35d血清中VP2的抗体水平达到1: 5120,明显高于VP2表达载体单免疫组(P<0.01)。淋巴细胞增殖实验表明,两组免疫小鼠的淋巴细胞刺激指数均明显高于阴性对照组(P<0.01),共免疫组的刺激指数又明显高于单免疫组(P<0.05)。共免疫小鼠淋巴细胞γ干扰素的表达水平明显高于单免疫组和阴性对照组(P<0.01)。这些结果表明,cIL-2表达载体可明显提高CPV VP2基因疫苗的免疫应答水平,这为IL-2作为生物佐剂在动物DNA疫苗的研究和应用提供了科学依据。
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