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本论文采用了急性镉(Cd2+)染毒的实验方法,分别设置了:空白对照组、3个Cd2+浓度组(29、58、87 mg/L)、3个不同浓度的低分子量壳聚糖(low molecular weight chitosan, LMWC)与Cd2+联合作用组(58 Cd2++20 mg/L LMWC、58 Cd2++40 mg/L LMWC和58 Cd2++80 mg/L LMWC),经处理96h后,研究对长江华溪蟹(Sinopotamon yangtsekiense)肝胰腺、鳃、心脏和肌肉四种组织的损伤程度。首先,采用2,4-二硝基苯肼(DNPH)比色法测定了组织中蛋白质羰基(protein carboyl, PCO)含量;KC1-SDS沉淀法测定了DNA与蛋白质交联率(DNA-protein crosslinks coefficient, DPC)。其次,就Cd2+对四种组织中一氧化氮(nitric oxide, NO)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)及与钙稳态相关的两种酶Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活力的影响及不同浓度LMWC与Cd2+联合作用进行了研究。还有,为了进一步探讨Cd2+致机体毒性作用机理及LMWC对机体的防护作用,采用实时荧光定量PCR方法,测定了四种组织中金属硫蛋白mRNA(MTmRNA)的表达。结果显示:(1)经Cd2+作用后,肝胰腺、鳃、心脏和肌肉四种组织中PCO含量和DPC交联率均呈现升高趋势,其中在58、87mg/L Cd2+作用下,肝胰腺和鳃中PCO含量显著增加,且DPC交联率显著升高;但是心脏和肌肉中两种指标均无显著变化。当LMWC与Cd2+联合作用后,与Cd2+单独作用相比,肝胰腺和鳃组织中PCO含量均显著下降,而心脏和肌肉中的PCO含量变化不显著;肝胰腺、鳃、心脏、肌肉四种组织中DPC都有显著或极显著下降。(2)随着Cd2+浓度增加,肝胰腺和鳃组织中的NO含量显著增加,心脏和肌肉中NO含量无显著变化;当镉浓度58mg/L时,肝胰腺组织中iNOS活力极显著升高,鳃组织iNOS活力显著升高,而心脏和肌肉中iNOS活力变化不显著。当LMWC与Cd2+联合作用后,与Cd2+单独作用相比,在浓度58 mg/L Cd2++80 mg/L LMWC时,肝胰腺、鳃和肌肉组织中NO含量显著下降,而心脏中NO含量变化不显著;iNOS活力变化趋势与NO的变化类似。(3)当Cd2+单独作用时,肝胰腺和鳃组织中Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase的活力显著下降,且当Cd2+浓度58、87mg/L时,鳃中Na+-K+-ATPase的活力有极显著下降,肝胰腺有显著下降,而心脏和肌肉组织变化不显著;Ca2+-ATPase活力变化趋势与Na+-K+-ATPase的变化趋势相同。当LMWC与Cd2+联合作用时,与Cd2+单独作用相比,肝胰腺和鳃组织中Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活力均显著升高,而心脏和肌肉组织中Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活力变化不显著。(4)在较高浓度58 mg/L Cd2+胁迫下,肝胰腺和鳃组织中MT mRNA表达显著升高;肌肉组织在29 mg/L Cd2+时表达显著升高,而心脏组织中的表达在各个剂量组均无显著性变化。与58 mg/L Cd2+单独作用相比,LMWC与Cd2+联合作用,四种组织中MT mRNA的表达呈现下降趋势,其中肝胰腺和鳃组织中MT mRNA的表达下降较显著,而心脏和肌肉中的下降无显著性差异。结论:(1)镉胁迫下,长江华溪蟹四种组织中的PCO含量和DPC均升高,且具有组织差异性;当LMWC与Cd2+联合作用时,PCO含量和DPC减少。LMWC对镉引起的蛋白质氧化损伤有一定保护作用。(2)镉能抑制长江华溪蟹四种组织中Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活力;在LMWC与镉联合作用下,Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活力有一定程度的升高,有助于维持细胞内的钙稳态。(3)镉能使长江华溪蟹四种组织中iNOS活力升高,产生大量NO;在LMWC与镉联合作用下,NO含量和iNOS活力有一定程度的下降,减轻了NO对机体的毒性作用。(4)镉能够诱导长江华溪蟹四种组织中MT mRNA的表达;在LMWC与镉联合作用下,MT mRNA的表达有一定程度的下降,进而起到保护机体的作用。