蚕丝作为软骨组织工程支架材料的实验研究

来源 :复旦大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qy19871120wr
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:进一步证实蚕丝具有良好的生物相容性;观察蚕丝的体内降解过程;探讨钙盐溶解对蚕丝降解性的影响;比较微溶蚕丝、切割蚕丝与PGA在细胞黏附性方面的差异;探讨用蚕丝作为组织工程支架体外构建软骨的可行性。 方法:实验分三个部分:第一部分蚕丝生物相容性及降解性研究,将脱胶后的蚕丝在CaCL.H2O(摩尔比1:8)溶液中按不同时间进行溶解,沉淀于直径lOmm培养皿底部自然干燥呈圆盘状,剪刀剪成数块3×5mm2大小薄片。取实验用昆明小鼠54只,随机分为:cacl2处理20min组;cacl2处理60min组;未处理组,每组18只,每只小鼠背部皮下埋植3块材料。埋植术后1月、2月、3月、4月、6月、8月,每组各处死小鼠2只,取出材料。埋植术后12月,处死剩余小鼠。行大体观察、组织学切片观察蚕丝的降解情况、降解产物对组织的影响及钙盐溶解对其降解性的影响。第二部分蚕丝与PGA的细胞黏附性比较研究,通过亲水性测试及扫描电镜观察切割蚕丝性能及结构变化,取新生兔关节软骨消化分离获取软骨细胞,体外培养扩增,将传至第3代细胞消化下来制成l×105/ml浓度单细胞悬液,以每孔105个细胞(1m1)分别接种子微溶蚕丝材料和切割蚕丝材料及PGA材料上培养24h,然后通过细胞计数法及MTT法作黏附细胞数检测,评价黏附率。第三部分蚕丝复合兔关节软骨细胞体外构建组织工程软骨,选新生兔关节软骨消化分离获取的原代软骨细胞为种子细胞,分别试用切割蚕丝及PGA为支架材料,采用体外培养4周构建组织工程软骨。通过倒置相差显微镜、扫描电镜、组织学及免疫学检测评价新生软骨。 结果:第一部分蚕丝生物相容性及降解性研究结果:术后动物无不良反应,术区及邻近皮肤无红肿、水肿、破溃及异常隆起等。埋植术后1月、2月、3月、4月时可见材料表面包裹一薄层纤维结缔组织,外形较植入时略有缩小。6个月时cacl2处理60min组发现1块材料消失。8个月时cacl2处理20min组有1块及caclz处理60min组有2块材料消失。12个月时分别有7块和9块消失。以上结果提示蚕丝已降解可能。组织病理学检查可见,最初几月各组均可见异物巨细胞排列于蚕丝周围,随月份增加逐渐减少,少见白细胞及淋巴细胞浸润。体内埋植2月后多数切片均可见蚕丝有裂解现象,cacl2处理60min组较20min组出现早且明显。6个月的组织切片中可以观察到蚕丝局部结构消融现象。第二部分蚕丝与PGA的细胞黏附性比较研究结果:经过切割处理,蚕丝亲水性明显增加,扫描电镜下可见经切割后蚕丝表面有更多的微丝剥脱,使得网孔增加、孔隙减小,丝与丝之间连接增加。细胞计数法测得微溶蚕丝、切割蚕丝及PGA三种材料黏附率分别为67.3%、84.2%、77.8%,MTT法测得三种材料黏附率分别为68.3%、83.3%、77%。各组数据经方差分析,微溶蚕丝组与切割蚕丝组有统计学差异,切割蚕丝组与PGA组无统计学差异。第三部分蚕丝复合兔关节软骨细胞体外构建组织工程软骨研究结果:倒置相差显微镜下见软骨细胞接种24h后单个或成团吸附在支架纤维表面或密布于纤维孔隙中。培养5天时,可见大部分纤维上均有细胞缠绕,纤维增粗。培养1周时外观有所增大,复合物密不透光。复合物培养2周时扫描电镜下观察,可见细胞呈多角状伸展开来,胞外基质分泌旺盛,黏附并包绕蚕丝纤维,成片状沉积覆盖于材料表面并进入支架内部。体外培养4周后,进行组织学检测,可见蚕丝构建的组织工程化软骨组织能形成近似于正常软骨的结构。免疫组化检测可见蚕丝构建的软骨组织中有被染成棕黄色的II型胶原。 结论:(1)天然蚕丝具有良好的生物相容性,脱去丝胶后埋植皮下1月后少见急性炎症细胞浸润。(2)蚕丝体内1年左右可以降解,降解产物不产生炎症反应。(3)经过钙盐溶解处理后降解时间加快,溶解20分钟与60分钟在降解率方面比较无统计学差异,而20分钟微溶解对蚕丝结构性能影响较小,更适合用作组织工程支架材料。(4)切割蚕丝具有良好的亲水性和细胞黏附性,细胞黏附率较未切割组相比较有统计学差异;和PGA相比无统计学差异(5)切割蚕丝纤维制作的支架能够维持软骨细胞立体培养的三维环境条件。孔隙大小适中,利于细胞进入材料内部。(6)软骨细胞在蚕丝支架上生长旺盛,分泌大量基质,连成片状。(7)体外构建4周可见软骨样组织形成。
其他文献
一、引言rn随着互联网的发展,微博这一网络新媒体也应运而生.从2009年微博的诞生,到2010年进入人们的视野,又到微博上市,受到各界人士的广泛关注.微博也成为大学生扩大自己交
英语和汉语存在诸多差异,本文以英汉对译版《我之于书》为例,通过实例分析,来阐述二者之间的差异,同时探究差异的原因,旨在帮助读者了解差异并提高其外语学习水平,同时也促进
近几年来,随着人们法律意识和法律服务需求的提高,法制节目越来越多地受到观众的喜爱和推崇。从中央到地方,各级电视台纷纷兴办起了法制节目,但不少问题也随之出现。尤其是地
用系统功能语法对古诗英译进行分析是最近几年逐渐兴起的一种新的诗歌翻译研究方法.本文从韩礼德的功能语言学角度出发,对唐代诗人李白的《静夜思》的英译文进行经验纯理功能
语言与社会是相互影响相互制约的.社会语言学的发展使更多的学者把目光投向了社会对语言的影响研究.社会语言学首先在西方兴起.西方语言学家拉博夫和特鲁吉尔首先提出了语言
成语是特殊的语言单位.也是语言中最活跃的部分,通常蕴涵着浓郁的民族文化.加上独特的形象用法和修辞色彩,往往构成翻译实践的难点,从而引起了翻译工作者的普遍重视.rn成语的
英语教学的目标是培养学生用英语流利、得体地进行交际的能力,即理解能力(听、读)和表达能力(说、写、译).表达能力指的是能否正确用英语来表达自己的思想,其基本准则是:在英
民族的发展既包括文化的发展,也包括经济的发展.任何民族的文化和经济发展都是在特定的时空条件下产生并且发展的,并与其所在地区的生态环境有密不可分的关系.民族发展受到地
观音文化是我国历史文化传承的重要体现,中华传统的特色观音文化就是慈悲文化,具有很深的根源.本文将针对遂宁观音文化的发展及地域特征,整理并研究观音文化和遂宁之间的联系
本文以含数字“九”的成语为研究对象,从语义生成和理解两个角度来分析含数字“九”的成语.运用认知语言学中的隐喻和转喻理论来解释含数字“九”的成语语义的生成机制,运用