论文部分内容阅读
近些年来,稀土荧光二氧化硅纳米颗粒因为其具有明显的信号放大效应得到了广泛关注。不同于量子点和荧光染料等其他荧光标记探针,稀土荧光二氧化硅纳米颗粒具有发射带窄,Stokes位移大,荧光寿命长等特点,可以大大消除背景干扰,非常适用于荧光免疫分析中生物分子的荧光标记,尤其是在农兽药残留的快速免疫层析方面引起了越来越多的关注。作为荧光标记探针,稀土荧光二氧化硅纳米颗粒具备以下几点特征:粒径小,良好的亲水性,良好的生物相容性,良好的稳定性以及易离心分离。本文利用微波辅助合成技术合成稀土荧光二氧化硅纳米颗粒BHHCT-Eu3+@Si02,对其进行表征及荧光性能研究,并建立了一种快速高效的荧光免疫层析分析方法,用于牛奶样品中硫酸卡那霉素(kanamycin,Kana)和磺胺类抗生素(sulfonamides,SAs)的检测。(1)采用微波辅助合成技术,制备了共价型BHHCT-Eu3+@Si02荧光稀土二氧化硅纳米颗粒,通过单因素实验,优化微波反应时间、微波反应功率、微波反应温度和氨丙基三甲氧基硅烷(APTMs)与4,4’-二(1”,1”,1”,2”,2”,3”,3”-七氟-4”,6”-己二酮-6”-基)-氯磺酰-邻-三联苯(BHHCT)摩尔比对BHHCT-Eu3+@Si02纳米颗粒荧光性能的影响,通过透射电镜(TEM)、X能谱分析(EDS)及傅里叶红外光谱(FT-IR)对其结构和形态进行了表征,并研究了该方法制备的荧光纳米颗粒的荧光性能。(2)以微波辅助合成的BHHCT-Eu3+@SiO2纳米颗粒为荧光标记探针,以醛基葡聚糖为交联剂,将卡那霉素单克隆抗体(简称Kana-ab)进行荧光标记,实现对卡那霉素残留的荧光免疫层析分析。利用凝胶电泳成像技术结合荧光读数仪优化该荧光试纸条的制备条件,通过荧光读数仪对卡那霉素的线性范围和检测限进行检测。该荧光免疫层析检测方法对Kana的检测限为0.85 ng·mL-1,半抑制率(IC50)为12.76ng·mL-1,线性范围为3.0-76ng·mL-1,添加回收率范围为 85.83%-99.71%,RSD 在 3.11%-4.64%之间,与 Kana 类似物的交叉反应均<1%,与ELISA方法测定结果相关性良好。(3)以微波辅助合成的BHHCT-Eu3+@SiO2纳米颗粒为荧光标记探针,合成磺胺单克隆抗体荧光标记结合物,制备磺胺残留荧光免疫层析试纸条,建立牛奶中磺胺类抗生素快速定量检测体系。研究表明,建立的荧光免疫体系可以实现对SMM、SMD、SDM、SMR、SDT、SLPD、SMT、SD、SMZ、GMP、SMP 和 SQX 12 种磺胺类抗生素的快速定量检测,最低检出限低达0.04 ng·mL-1。该检测体系操作简便、快速、灵敏,用于牛奶中12种磺胺类抗生素的同时检测,取得满意的结果。