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目的:DNMT1高表达在DNA甲基化模式的转变和肿瘤的发生、发展中起促进作用。在前期已建立的哈萨克族食管上皮永生化细胞系的基础上,利用TALE技术构建DNMT1高表达的哈萨克族食管上皮细胞株,分析叶酸在MNNG致哈族食管上皮细胞DNMT1高表达细胞DNA损伤及相关信号通路调控机制中的作用,探讨叶酸对MNNG致细胞损伤过程中的干预作用,为食管癌预防和治疗提供理论依据。方法:将哈族食管上皮细胞及哈族食管上皮DNMT1高表达细胞分别分为三组,使用MNNG进行染毒并分别施以低浓度叶酸、中等浓度叶酸及高浓度叶酸干预,使用倒置荧光显微镜观察各组细胞生长情况;应用单细胞凝胶电泳实验(彗星实验)检测各组细胞DNA损伤情况;应用RT-PCR方法检测各组细胞PI3K-AKT通路中PP2A、PTEN、AKT基因mRNA表达水平;应用Western blot法检测各组细胞PI3K-AKT通路中PP2A、PTEN、AKT的蛋白表达水平。结果:(1)两种哈族食管上皮细胞形态损伤情况随染毒时间延长而加重,且在相同干预情况下,DNMT1高表达细胞较非高表达细胞受MNNG影响更为严重,但高浓度叶酸组细胞较同类型同时期低、中浓度叶酸组生长情况良好,细胞死亡率低,细胞排列整齐,形态正常,细胞镜下形态最接近于同类同时期对照组细胞;(2)两种食管上皮细胞DNA损伤情况随染毒时间延长而加重,且哈族食管上皮DNMT1高表达细胞较哈族食管上皮细胞DNA损伤情况更为严重,表现为尾长在染毒早期、中期、晚期时高于正常细胞组,差异有统计学意义(t早=2.043,P=0.004;t中=2.217,P=0.030;t晚=2.418,P=0.016),DNMT1高表达细胞组Olive尾矩长度在早期、中期及晚期时高于正常细胞组,差异有统计学意义(t早=2.471,P=0.020;t中=2.412,P=0.016;t晚=2.047,P=0.004)。但高浓度叶酸组细胞较同类型同时期低、中浓度叶酸组DNA损伤情况较轻,Tail DNA%含量、尾长、Olive尾矩均低于低、中浓度叶酸组(P<0.05);(3)两种食管上皮细胞PP2A、PTEN基因mRNA表达水平及蛋白表达水平随染毒时间延长而降低,且DNMT1高表达细胞表达水平低于同时期同叶酸浓度哈族食管上皮细胞(P<0.05),而AKT基因mRNA表达水平及蛋白表达水平随染毒时间延长而上升,且DNMT1高表达细胞AKT基因mRNA表达水平及蛋白表达水平高于同时期同叶酸浓度哈族食管上皮细胞(P<0.05)。但高浓度叶酸组细胞较同类型同时期低、中浓度叶酸组PP2A、PTEN基因mRNA表达水平及蛋白表达水平较高,AKT基因mRNA表达水平及蛋白表达水平较低(P<0.05)。结论:哈族DNMT1高表达细胞较哈族食管上皮细胞更易受到MNNG影响,且随染毒时间延长细胞损伤程度加重,表现为形态改变、DNA损伤,以及导致PI3K-AKT通路中PP2A、PTEN基因mRNA及蛋白表达下调,AKT基因mRNA及蛋白表达上调;但高浓度叶酸可降低MNNG对细胞的损伤,保护PI3K-AKT通路中PP2A、PTEN、AKT基因的正常表达,保持充足的叶酸摄入对食管癌的发生发展可起到一定的保护作用。