【摘 要】
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井冈霉素由吸水链霉菌5008产生,它与吸水链霉菌柠檬变种产生的有效霉素具有一致的化学结构.以来自平面放线菌（Actinoplanes sp.50/110）的参与氨基糖苷类抗生素Acarbose生物合成
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井冈霉素由吸水链霉菌5008产生,它与吸水链霉菌柠檬变种产生的有效霉素具有一致的化学结构.以来自平面放线菌（Actinoplanes sp.50/110）的参与氨基糖苷类抗生素Acarbose生物合成的acbc基因为探针,通过Southern原位杂交,从吸水链霉菌5008的基因组文库中钓取了6个阳性柯斯质粒.酶切分析发现它们相互重叠,并且覆盖了染色体上近60kb的区域.利用其中一个柯斯质粒构建了基因置换载体pHZ2236,成功地以aac（3）IV置换了这一区域中30kb的染色体片段,并从分子水平上验证了置换的发生.对基因置换菌株进行生物活性测定及HPLC分析发现该基因突变菌株已丧失了合成井冈霉素的能力.进一步对这30kb染色体区域的测序发现17个开放阅读框（ORF）,通过与蛋白质数据库的比较分析推测了它们可能的功能,其中大部分基因可能参与了糖基的合成与修饰,包括jjnA(可能负责合成2-表-5-表-有效醇酮)、jjnB（可能参与ADP-葡萄糖的合成）、jjnCEFJK（可能与糖基修饰有关,包括氧化、还原和氨化）、jjnG（可能负责ADP-葡萄糖与二糖单位有效氧胺的缩合）以及jjnI（可能分解淀粉生成葡萄糖）,其它基因有的可能负责井霉素的分泌,如jjnH;有可能对整个基因簇具有调节功能,如jjnLM;还有的其生物学功能以及同井冈霉素生物合成的关系目前还不清楚,如jjnDNOPQ.归纳这些数据并结合国际上已发表的可能有效霉生物合成途径,推测了可能的井冈霉素生物合成途径.发展了以pOJ446为载体的新的吸水链霉菌5008接合转移系统,并尝试了以该系统来定位井冈霉素生物合物基因簇的边界.
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