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倒毛鸡是我国优质的地方品种鸡,贵州部分山区以农村散养形式少数存在。由于倒毛鸡的羽毛向前翻卷,使其保温效果较差,导致倒毛鸡极易受天气变化的影响,出现易感染疾病、存活率低下和生长速度较慢等现象,不易实现规模化饲养。为提高倒毛鸡的饲养效益,本研究开展了倒毛鸡消化道细菌菌群结构的研究,以及了解倒毛鸡在生长过程中消化道细菌菌群结构的变化动态,为提高倒毛鸡的饲养效益和扩大倒毛鸡的规模饲养提供一些参考依据。1.基于16SrDNA基因定量PCR检测方法建立:提取DH5α大肠杆菌全基因组,测定其浓度(1.29×10~7copies/μL)后,用灭菌双蒸水进行梯度稀释,以基于16SrDNA的细菌通用引物进行PCR扩增,以扩增产物电泳条带光密度值为判定指标,判定定量PCR检测方法的建立成功与否,结果显示:梯度稀释模板量与扩增条带光密度值存在良好的线性关系,其表达式为y=8.7562×-26.838(Y≤29.78),相关系数R为0.996,且具有良好的重复性和敏感性,可检测到浓度为166copies/μL的细菌模板。2.不同日龄倒毛鸡消化道菌群含量变化分析:于倒毛鸡5d、10d、20d、40d、60d、90d和120d时间段时,分别宰杀5~10只,收集嗉囊、腺胃、肌胃十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠的适量内容物,采用上述PCR方法进行细菌含量分析,结果:随着日龄的增长,倒毛鸡消化道不同部位内容物细菌含量呈上升趋势,但到20~40日龄后消化道细菌含量变化不大;总体上,嗉囊、腺胃和肌胃内容物细菌数量最多,十二指肠、空肠和回肠内容物中细菌数量较少。3.不同日龄倒毛鸡消化道菌群结构分析:于倒毛鸡5d、10d、20d、40d、60d、90d和120d时间段时,分别宰杀5~10只,收集嗉囊、腺胃、肌胃十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠的适量内容物,采用PCR-DGGE方法进行消化道菌群结构分析,结果:共检测到132个条带,回收条带进行测序并与GenBank相应序列比对发现41条不同序列条带,分属于变形菌门、厚壁菌门、放线菌门、拟杆菌门、鞭毛菌亚门、接合菌亚门和异常球菌-栖热菌门,其中包含了乳杆菌属、芽孢杆菌属、双歧杆菌属等25个菌属。其中,5~20日龄时间段倒毛鸡消化道内容物菌属以乳杆菌属、优杆菌属和葡萄球菌属为主,40~90日龄段以乳杆菌属、优杆菌属、分枝杆菌属和葡萄球菌属为主,而120日龄段以分枝杆菌属和葡萄球菌属为主。