结肠癌在我国的发病率有逐年上升趋势,目前的传统治疗方法对不能手术切除的结肠癌效果欠佳,因此,积极探索新的结肠癌治疗方法具有重要意义。　　 癌症的靶向基因-病毒治疗策略(cancer targeting Gene-viro-therapy)已经成为一个研究热点。目前,实现肿瘤基因-病毒的靶向性治疗主要是通过肿瘤组织特异性的启动子来调控病毒载体或治疗基因,从而使得重组基因-病毒对细胞的杀伤具有肿瘤选择性。GPA33(glyeoprotein A33,A33),是一个43 kDa大小的跨膜糖蛋白,Heath等在1997年发现其在95％以上的原发和转移结肠癌中过表达,且Northern blot分析显示2.8 Kb大小的A33 mRNA只有在结肠癌细胞系中显示A33抗原阳性,在其他组织中几乎没有表达。因此将糖蛋白A33基因的启动子应用于靶向基因-病毒治疗平台,可能具有极好的结肠癌组织特异性。　　 在本研究中,首先通过构建A33核心启动子和带SV40增强子的A33核心启动子(eA33)的荧光素酶报告基因载体pGL3-A33和pGL3-eA33,与内参照pRL-SV40质粒共转染至不同的细胞系中,利用双荧光素酶检测系统检测分析了A33和eA33启动子在不同细胞系中的转录活性。结果显示,A33核心启动子在结肠癌细胞系中具有转录活性低但结肠癌特异性好的特点,而在其他类型癌细胞中基本没有活性。同时发现,eA33在各类癌细胞中的转录水平与A33相比,均呈大幅度提高,有显著性差异(P＜0.01),但SV40增强子能显著增强A33启动子转录活性的同时减低了其结肠癌特异性。因而我们选择了A33核心启动子构建重组病毒,使用结肠癌特异性A33启动子代替病毒E1A基因的启动子,删除病毒E1B蛋白基因,构建出结肠癌特异性增殖腺病毒载体Ad.A33-E1A-△E1B,期望达到双重靶向杀伤结肠癌细胞,并提高其对正常细胞的安全性的治疗效果。　　 治疗基因的选择是肿瘤的靶向基因-病毒治疗取得成功的关键之一。为增强溶瘤腺病毒对肿瘤细胞的杀伤达到更佳效果,我们利用ST13(suppression oftumorigenicity-13)抑癌基因作为肿瘤治疗基因进行研究,在Ad.A33-E1A-△E1B载体中插入ST13基因表达框,增强其对结肠癌细胞的杀伤效果。继而研究了该重组病毒对结肠癌细胞生长的体外抑制效应。细胞实验结果表明,重组病毒对正常细胞MRC-5具有非常好的安全性,但对Beas-2B细胞存在一定的敏感性;在同样的MOI时,重组病毒对非结肠癌细胞系的杀伤作用与结肠癌细胞系相比差异不显著。　　 针对这样的实验结果,我们认为由于A33启动子的转录活性太低,导致腺病毒的复制能力和ST13抑癌基因的表达水平不高,使得重组病毒对结肠癌细胞系的杀伤作用不强,且没有表现出结肠癌特异性杀伤作用。