【摘 要】
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葡萄病毒B（Grapevine virus B,GVB）属于乙型线形病毒科（Betaflexiviridae）、葡萄病毒属（Vitivirus）。感染该病毒的葡萄植株树势衰退,果实品质下降,所以对该病毒的防治成为亟需解决的问题。为了明确地了解和防御该病毒,我们分析GVB分离物基因组的分子特征、各基因与症状的关系以及发病时间,对病毒基因组的沉默抑制子进行筛选,这将会加深人们对该病毒致病分子机理的认识
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葡萄病毒B（Grapevine virus B,GVB）属于乙型线形病毒科（Betaflexiviridae）、葡萄病毒属（Vitivirus）。感染该病毒的葡萄植株树势衰退,果实品质下降,所以对该病毒的防治成为亟需解决的问题。为了明确地了解和防御该病毒,我们分析GVB分离物基因组的分子特征、各基因与症状的关系以及发病时间,对病毒基因组的沉默抑制子进行筛选,这将会加深人们对该病毒致病分子机理的认识,为防御该病毒病害提供新的思考途径。主要研究结果如下:（1）克隆了GVB的全长基因组。利用RT-PCR方法并结合RACE技术,从内蒙古呼和浩特克隆了2个GVB分离物的全长基因组（GVB Hohhot-1、GVB Hohhot-2）,大小均为7609 nt,编码5个开放阅读框（Open Reading Frame,ORF）。GVB Hohhot-1、GVB Hohhot-2与22个已报道的GVB分离物全基因组核苷酸序列一致性分别为74.9%～96.5%和74.8%～96.4%。系统发育分析结果表明,基于24个GVB分离物全基因组序列构建的进化树分为两组,基于外壳蛋白（Coat Protein,CP）基因序列构建的进化树分为四组。本研究中2个GVB分离物与加拿大分离物（Gen Bank登录号:MZ440726）的亲缘关系最近,序列一致性分别为96.5%、96.4%。在24个GVB全长基因组序列间无重组事件。（2）发现ORF5是一个致病相关因子。采用融合克隆的技术将GVB各编码基因插入PVX载体,通过农杆菌浸润法接种寄主植株,发现ORF5加强了PVX的致病性,表明GVB ORF5的确是一个较强的致病相关因子。（3）基因沉默抑制子筛选。采用基因插入的方法将GVB各个基因插入植物双元表达载体PCV-GFP-N1中,通过农杆菌浸润法接种本氏烟16C,暂时没有发现符合预期的基因沉默抑制子,需要进一步研究。
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