论文部分内容阅读
目的研究奥沙利铂对TRAIL诱导结肠癌RK0细胞凋亡的影响,同时探讨联合用药的作用机制、对caspase-3蛋白表达的影响、以及对PI3K/Akt通路的影响。方法1、MTT法检测TRAIL及奥沙利铂对细胞的增殖抑制作用。2、瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态学变化。流式细胞术检测细胞凋亡。3、Westernblot法检测Akt,p-Akt、Caspase-3蛋白表达。4、统计学处理:每次实验重复3次,数据以x±s表示,采用SPSS16.0软件进行t检验和单因素方差分析。结果1、不同浓度TRAIL和奥沙利铂单药及联合用药对结肠癌RKO细胞的抑制作用:TRAIL作用结肠癌RKO细胞,只引起轻度的细胞凋亡,MTT分析显示0,25,50,100,200,400ng/ml的TRAIL作用结肠癌RKO细胞24h,细胞增殖率分别为101.9±7.3%,108.8±6.4%,113.2±12.1%,101.5±5.8%,76.5±5%,73.3±7.2%,与对照组比P>0.05。结果表明结肠癌RKO细胞对TRAIL不敏感。0、10、20、40、80μg/mL奥沙利铂处理结肠癌RKO细胞24、48、72h,IC50分别为44.3±7.6、22.3±6.1、9.8±4.5ng/mL,与对照组比P<0.05,结果表明奥沙利铂可以抑制结肠癌RKO细胞增殖,并呈时间-剂量依赖关系。100ng/mlTRAIL联合40μg/mL奥沙利铂后细胞增殖率由奥沙利铂单药组的48.4±5.2%降至30.6±2.7%,与单药组比P<0.05。结果表明奥沙利铂增强TRAIL诱导结肠癌RKO细胞凋亡的敏感性。2、奥沙利铂可引起肠癌RKO细胞凋亡:瑞氏-吉姆萨染色观察,40μg/mL奥沙利铂作用于结肠癌RKO细胞24h,可观察到典型凋亡小体等凋亡形态,结果表明奥沙利铂可以诱导结肠癌RKO细胞凋亡。3、奥沙利铂增强TRAIL诱导结肠癌RKO细胞凋亡:100ng/ml的TRAIL作用结肠癌RKO细胞后细胞凋亡比率由0.9±2.7%仅增加到2.5±2.1%,与对照组比P>0.05,1h,3h,6h,12h,24h,p-Akt的活化逐渐增强,于6小时和12小时达高峰,24h开始减弱,没有观察到活化的Caspase-3。结果提示:TRAIL参与结肠癌RKO细胞PI3K/AKT通路活化,导致结肠癌RKO细胞对TRAIL不敏感。40μg/ml奥沙利铂作用结肠癌RKO细胞24h,细胞凋亡比率为9.6±1.9%,与对照组比P<0.05,明显抑制了P-Akt的水平,可以观察到活化的Caspase-3。100ng/mlTRAIL联合40μg/ml奥沙利铂作用24h,凋亡比率提高到23.5±3.5%,与单药组比P<0.05,同样抑制了p-Akt的水平,同时可以观察到活化的Caspase-3,且比奥沙利铂单药组略有增强。结果提示:奥沙利铂可以引起结肠癌RKO细胞凋亡,并通过抑制Akt的活化提高结肠癌RKO细胞对TRAIL的敏感性。结论奥沙利铂通过抑制TRAIL诱导的PI3K/Akt通路的活化,增强结肠癌RKO细胞对TRAIL的敏感性。