重组人白细胞介素-15的基因克隆、原核表达以及蛋白纯化

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重组人白介素-15具有广泛的应用前景,本论文研究了它的制备工艺。目前人们认为hIL-15至少可以有以下三个用途:作为疫苗的佐剂;治疗血小板减少;治疗实体瘤。研究制备工艺意味着要在提高产率的同时降低成本。这里主要从原核表达和蛋白纯化两个方面进行了工艺的改进。本论文的研究主要包括工程菌的构建,蛋白的表达和纯化。从外周血单核细胞提取总RNA,RT-PCR之后,获得了人白介素-15的基因序列。为了筛选获得一种高效表达的工程菌株,构建了四种类型的表达质粒,从而比较他们的表达效率。通过优化表达条件,提高了蛋白的表达量。然后通过三步纯化,经过包涵体的处理,离子交换层析,凝胶过滤层析,使蛋白的纯度达到要求,初步建立起了重组人白介素-15的纯化工艺。也考虑了不同复性条件和保存方法对蛋白活性的影响。通过本论文的实验,找到了一种可行的制备工艺。使蛋白的纯度可以达到95.3%,比活能达到1.1×107IU/mg。实验结果达到了预期的目标,为以后工艺放大打下了坚实的基础。
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