论文部分内容阅读
目的:目前,随着各种诊断方式的更新及治疗方法的进步,鼻咽癌的5年生存率有了一定提高但是仍不理想,早期诊断仍较困难,治疗效果仍欠佳。在前期研究中,发现免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)M在多种头颈部肿瘤包括鼻咽癌中存在广泛表达,利用抗人IgM抗体干预后,人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤的生长受到明显抑制,并能促进其凋亡。Ig对人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤具有生长因子样作用,能够促进其生长,但其具体机制还尚不明确。随着对肿瘤形成机制的深入研究,人们发现血管生成与肿瘤的生长转移关系密切,抗血管生成治疗也成为肿瘤治疗中的重要组成部分之一。本实验是在前期研究的基础上,获取人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤组织标本,通过检测移植瘤组织增殖指标以及血管生长相关指标,生存素-Survivin、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、血管生成素-2(angiopoietin,Ang-2),移植瘤内微血管密度(microvessel density,MVD),进一步探讨抗人IgM抗体抑制人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠成瘤的可能机制,为鼻咽癌发病机制的研究及临床治疗方案提供新的思路。 方法:取人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤组织,用含1％蜂蜡的石蜡包埋组织,轮转式切片机将其切成4μm厚的病理切片,应用免疫组化链霉亲和素-生物素化过氧化酶复合物染色法(Streptoavidin-biotin-enzyme complex,SABC)检测瘤体组织中Survivin、PCNA、Ang-2表达情况;应用免疫组化链霉亲和碱性磷酸酶染色法(Streptavidin-Alkaline Phosphatase,SAP)检测CD31标记的移植瘤内微血管,并计数MVD表达情况。(1)Survivin,PCNA:阳性染色呈黄色至棕黄色,前者主要位于胞膜或胞质;后者阳性染色部位主要位于细胞核。每张染色切片在Olympus BH2显微镜下,低倍镜(×100)随机选择染色明显的5个视野,高倍镜(×400)下采图,共5张切片,每张切片采集5张图片,采用Image-pro Plus6.0软件对Survivin,PCNA阳性染色的病理图片作免疫组化半定量分析,记录平均光密度值。(2)Ang-2:Ang-2阳性染色呈棕黄色,主要位于细胞浆或细胞膜。由两位医师分别观察每张切片,选择有代表性的区域,用OLYMPUS BH2显微镜在高倍镜下(×400)对切片进行摄像,共5张切片,每张切片采集5张图片,采用Image-pro Plus6.0软件对采集的Ang-2阳性染色切片作免疫组化半定量分析,记录平均光密度值。(3) MVD计数:阳性染色(CD31标记)呈鲜红色至红色颗粒,主要位于血管内皮细胞膜,阴性染色为蓝色。计数方法参考Weidner[18]的方法进行,先寻找染色清楚的瘤体内微血管,在染色密集区域寻找(低倍镜,×40),然后在200倍镜(20×10)下计数肿瘤内的微血管数目,包括毛细血管和静脉数目,瘤旁组织内微血管不计数,记录5个视野内的微血管数,取平均值,结果以(x-±s)表达。统计数据运用SPSS16.0 for windows软件作统计学分析, P<0.05显示差异有统计学意义。 结果:(1)Survivin、PCNA表达情况,抗人IgM抗体干预实验组Survivin、PCNA的平均光密度值分别为(0.153±0.009)、(0.084±0.025),IgG组Survivin、PCNA表达的平均光密度值为(0.221±0.019)、(0.149±0.016),PBS对照组Survivin、PCNA表达的平均光密度为(0.246±0.021)、(0.163±0.018),实验组(抗人IgM抗体干预)组Survivin和PCNA阳性表达的结果显著低于IgG组和PBS对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2) Ang-2、MVD表达情况,抗人IgM抗体干预组Ang-2表达的平均光密度值为(0.121±0.021),IgG组Ang-2表达的平均光密度值为(0.188±0.013),PBS对照组的平均光密度为(0.196±0.005),实验组(抗人IgM抗体干预)Ang-2阳性表达的结果显著低于IgG组和PBS对照组,差异有统计学意义(P<0.05);MVD表达情况,抗人IgM抗体干预组MVD为(12.54±0.47),显著低于IgG组(16.95±0.21)及PBS对照组(17.17±0.47),统计学分析差异有统计学意义(P<0.05)。 结论:(1)抗人IgM抗体可以显著抑制人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤内Survivin、PCNA及Ang-2的表达。(3)抗人IgM抗体对人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤组织的新生血管形成有明显的抑制作用,这可能与抗人IgM抗体通过抑制Ang-2及Survivin的促血管生成的作用,拮抗IgM的生长因子样作用有关。(4)抗人IgM抗体可能成为鼻咽癌抗血管生成靶向治疗的新方向。