目的：构建结核分支杆菌分泌性低分子质量抗原Mtb8.4基因的原核表达重组质粒，并检测其在大肠杆菌中的表达。方法：采用PCR技术，以质粒pcDNA3.1(+)-Mtb8.4为模板，扩增出Mtb8.4基因；PCR产物胶回收纯化后，经限制性内切酶EcoRⅠ+NheⅠ双酶切,定向克隆到质粒pET-His T7启动子的下游；双酶切和PCR法鉴定重组子；阳性重组子转化E.coli BL21（DE3）pLysS，经IPTG诱导后，使用十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）法分析Mtb8.4蛋白质抗原在大肠杆菌中的表达。结果：构建了结核分支杆菌Mtb8.4原核表达重组质粒pET-His-Mtb8.4，测序表明具有正确的编码序列；菌体蛋白经SDS-PAGE电泳，含阳性重组子的菌体蛋白中出现一新蛋白带,与预计相符。结论：构建的大肠杆菌重组体能够表达结核分支杆菌Mtb8.4蛋白质抗原，为进一步大规模抗原的纯化、相应抗体的制备及其免疫效应的检测奠定了基础；为进一步研究结核杆菌Mtb8.4抗原可否作为结核分支杆菌DNA疫苗或亚单位疫苗的候选成分提供理论依据。