聚焦电层析分离蛋白质的原理是在聚焦层析的基础上,在分离柱的两端施加电压,使蛋白质分子在离子交换和电场力的双重作用下,根据等电点的不同进行分离。本文的实验内容,包括用聚焦电层析分离人血清蛋白,分离牛血清白蛋白和牛血红蛋白的混合物,分离牛血清白蛋白、牛血红蛋白、核糖核酸酶和溶菌酶4种蛋白的混合物,分离木瓜蛋白酶;用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白分离效果;用考马斯亮蓝法测定蛋白含量,计算回收率。实验结果证实了聚焦电层析在分离蛋白质方面的应用价值。分离介质可以用阴离子交换葡聚糖凝胶DEAE-Sephadex A-50或阳离子交换纤维素CM-52。离子交换纤维素CM-52不容易被析出的蛋白质堵塞,应用范围更广。流动相采用pH变化的缓冲液,在柱中形成pH梯度。在通电的情况下进行聚焦电层析,在分离蛋白质的混合物时,比不通电的聚焦层析的分离效果更好。聚焦电层析采用的缓冲液pH变化范围包括6个pH单位,分离的蛋白的等电点也相差6个pH单位,说明聚焦电层析适宜于分离等电点相差比较大的蛋白质。各种蛋白分离后的回收率在80%以上。以上结果表明,聚焦电层析是一种有希望广泛应用于蛋白质分离的新的分离方法。