胡杨大片段基因转化拟南芥及转化型分析

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胡杨(Populus euphratica)作为杨属(Populus)最古老的物种之一,具有极强的环境适应能力,是研究木本植物耐受盐碱、干旱、高温等极端逆境性状的优良材料。基因工程技术迅速发展之后,胡杨研究的主要领域从以组织培养为中心的一系列生理生化实验延伸向分子领域。研究证明,虽然以亲缘植物为模板克隆基因研究胡杨的耐盐碱模式在方法上可行,但因为物种差异和基因表达调控的复杂性,不能深入和彻底地阐明胡杨应对胁迫环境的分子机制。随着技术和新的科研成果诞生,对胡杨基因的挖掘分析从单一基因、单一信号通路途径发展到多基因、多信号通路途径是主要趋势。本学位论文使用胡杨基因组大片段插入pCLD04541质粒构建的BIBAC(Binary Bacterial Artificial Chromosome,BIBAC)文库,花序浸染法(Floral-dip)转化野生型拟南芥(Arabidopsis thaliana)后,通过筛选表现出特异生长性状的转化型植株并分析,旨在完善胡杨转化基因组学研究平台,进一步筛选胡杨特异的性状基因(簇)。主要研究结果如下:  (1)使用102个文库克隆,共转化1320株拟南芥,得到T1代分子检测阳性植株225株,共34个株系,其中有可观察性状的株系6个。由于有败育情况发生,最终获得性状可稳定遗传的株系5个,主要集中于植株主茎和花序发育、侧茎分枝形成、种子形成等方面。  (2)收集了可观察性状克隆下的植株形态数据,并进行数理统计分析。发现形态上的变化主要有:变小、无柄、无茸毛,主茎或缺失,花序消失,果荚变短或败育,果荚增生、数目增多,种子增大、增重,等。  (3)发现了转化型植株中2例矮化、败育型,1例果荚缩短、种子减产型,3例发育快速、植株高大型并种子增大、增重型,并对其产生原因进行了分析。分析发现,68A1G5、68B1E2两个株系对野生型拟南芥矮化明显,花序消失,出现不同程度的败育;68A1E3株系对野生型拟南芥发育异常,果荚明显缩短,种子数量骤减;68A1B2、78B1B9、78B2A6三个株系对野生型拟南芥生长优势明显,出现不同程度的侧枝增多、果荚增生、种子增长增重,在同等条件下,生长发育速度加快。可以推测,转化型拟南芥成功整合农杆菌所携带的胡杨大片段基因并表达,因此表现出上述性状。
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