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中医理论认为临床常用中药黄芪蜜炙(honey-processed Astragalus,HPA)可增强黄芪(Astragalus membranaceus,AM)“补中益气”的作用,从而用于脾肺气虚、中气下陷之证。课题组前期药效学研究表明HPA水提液较AM水提液有更好的补气作用。而多糖是HPA水提液中一类重要的活性成分,本研究进一步考察蜜炙黄芪多糖(honey-processed Astragalus polysaccharides,HAPS)干预利血平致小鼠脾气虚证的药效作用,并结合微生物组学技术和代谢组学技术,从肠道菌群和肠道代谢生物标记物的角度探讨HAPS影响脾气虚证小鼠肠道免疫功能的作用机制。方法:腹腔注射利血平(0.2 mg/kg)15天建立脾气虚证小鼠模型,同时灌胃HAPS(60 mg/kg)和HPA水提液(8.4 g/kg),考察其对小鼠体重,体征(眼睛,粪便,毛发和神态)计算的脾气虚症状得分,免疫器官脏器指数,血清细胞因子(TNF-α和IL-1β),脾T淋巴细胞增殖能力,小肠长度和肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A,SIgA)等生理生化指标的影响;利用16S rRNA高通量测序技术分析HAPS对脾气虚证小鼠肠道菌群结构的影响;应用UPLC/Q-TOF MS技术进行盲肠内容物和粪便代谢组学分析,筛选HAPS干预脾气虚证小鼠的肠道相关生物标记物。结果:(1)与正常小鼠相比,脾气虚证小鼠体重增长缓慢,症状得分升高,脾脏和胸腺指数降低,血清TNF-α和IL-1β表达量减少,脾T淋巴细胞增殖能力下降,小肠长度减短和肠黏膜SIgA分泌量减少。HAPS和HPA水提液干预后脾气虚证小鼠体重增长恢复正常,症状得分减少,脾脏和胸腺指数,血清TNF-α和IL-1β表达量升高,脾T淋巴细胞增殖能力提高,小肠长度恢复,肠黏膜SIgA表达量升高。(2)脾气虚证小鼠肠道菌群结构失衡,物种丰富度和均匀度减少,致病菌增多引起物种多样性升高。从门水平上发现脾气虚证小鼠拟杆菌门相对丰度减少,厚壁菌门、放线菌门,变形菌门和ε-变形菌门相对丰度升高;属水平上发现多种菌属发生变化,例如乳酸杆菌属和另枝菌属相对丰度降低,拟普雷沃菌属、拟杆菌属和螺杆菌属相对丰度升高。HAPS能够增加脾气虚证小鼠菌群丰富度和均匀度,降低菌群多样性;能够调节拟杆菌门及其拟杆菌属,变形菌门及其螺杆菌属的相对丰度。HPA水提液对菌群丰富度、菌群度和多样性的调节能力较HAPS弱;其通过调节变形菌门和放线菌门,乳酸杆菌属、拟杆菌属、拟普雷沃菌属和螺杆菌属相对丰度调节菌群结构。(3)盲肠内容物和粪便代谢组学研究分别发现11和10个生物标记物,包括脂肪酸类,甘油磷脂类,甘油脂类,鞘脂类和和胆汁酸类物质。HAPS和HPA水提液可调节棕榈酸和鞘氨醇,亚油酸及其代谢产物(壬二酸和13-羟基十八碳二烯酸)和多种甘油磷脂和7-Ketodeoxycholic acid水平。HPA水提液还能调节牛磺胆酸,脱氧胆酸等胆汁酸类物质水平。HAPS和HPA水提液干预脾气虚证小鼠肠道代谢与甘油磷脂代谢,甘油脂代谢,亚油酸代谢和不饱和脂肪酸合成和脂肪酸降解等途径密切相关。此外,HAPS还对脂肪酸降解有显著影响。结论:HAPS能够作为HPA水提液发挥药效的重要基础物质,可显著改善脾气虚证小鼠的气虚症状,提高细胞免疫和肠道黏膜免疫功能。HAPS通过调节脾气虚证小鼠的肠道拟杆菌门及其拟杆菌属变形菌门及其螺杆菌属的相对丰度,促进宿主-肠道菌群对棕榈酸和鞘氨醇的代谢及促进肠黏膜SIgA的表达,并通过调节亚油酸及其代谢物和多种甘油磷脂水平,改善脾气虚证小鼠肠道免疫功能。