【摘 要】
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马流产沙门菌(Salmonellaabortusequi)可引起马属动物的马流产沙门菌病，又名马副伤寒，其典型特征为孕马流产。随着新疆马匹养殖数量的增加，该病已严重危害马养殖业的发展。马鼻
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马流产沙门菌(Salmonellaabortusequi)可引起马属动物的马流产沙门菌病，又名马副伤寒，其典型特征为孕马流产。随着新疆马匹养殖数量的增加，该病已严重危害马养殖业的发展。马鼻肺炎是由马疱疹病毒(Equineherpesvirus，EHV)1型和4型引起的严重危害新疆养马业的重要传染病之一，马疱疹病毒1型可引起妊娠母马流产，流行较广泛，可造成严重经济损失。FliC是马流产沙门菌重要的鞭毛蛋白及分子佐剂。gD为马疱疹病毒免疫及保护的有效蛋白。为探讨鞭毛蛋白FliC对马疱疹病毒gD的分子佐剂效应，本研究对马流产沙门菌FliC和马疱疹病毒gD基因进行融合表达并阐明FliC对gD质粒DNA的免疫增强效果。 本研究用PCR方法分别扩增FliC基因和gD基因的主要抗原表位，利用重叠延伸法将这2个基因进行融合，构建真核表达质粒pVAX1-FliC-gD，利用间接免疫荧光和westernblotting鉴定重组蛋白的表达。将提取纯化的重组质粒免疫C57BL/6小鼠，并设pVAX1-gD、pVAX1-FliC、pVAX1和PBS为对照。第二次免疫后三周以1×105PFU剂量的EHV-1-XJ2015滴鼻感染小鼠，并以马流产沙门菌最小致死量2×109CFU/ml攻击小鼠。对免疫小鼠的抗体水平、抗体亚型、IFN-γ和IL-4的水平和肺组织病毒含量进行检测，并对肺组织病理学变化进行观察。结果表明成功构建了重组质粒pVAX1-FliC-gD、pVAX1-gD、pVAX1-FliC，经间接免疫荧光和westernblotting鉴定该真核重组质粒可在体外表达。将提取纯化的重组质粒免疫C57BL/6小鼠，二免后抗体效价可达1:3200，融合表达质粒pVAX1-FliC-gD组小鼠血清中的总IgG1、IgG2a亚类和IFN-γ、IL-4水平均较pVAX1-gD免疫组、pVAX1-FliC免疫组显著增高(P＜0.01)。马流产沙门菌攻击小鼠后，pVAX1-FliC-gD免疫组对小鼠的保护力为58.3%。荧光定量PCR法检测小鼠肺脏病毒DNA含量，结果表明攻毒后第5dpVAX1及PBS免疫组病毒DNA含量最高，达到3.3×104copies/μL，且pVAX1-FliC-gD免疫组、pVAX1-gD免疫组病毒DNA含量相对于pVAX1及PBS免疫组有明显减少(P<0.01)。组织病理学观察结果表明：pVAX1-FliC-gD免疫组、pVAX1-gD免疫组能有效限制马疱疹病毒在肺脏中的复制，减轻肺脏病理变化。上述结果显示FliC作为分子佐剂可显著增强马疱疹病毒gD基因的免疫效果，为马疱疹病毒新型疫苗的研究奠定了基础。
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