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目的:携带免疫荧光的血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor 165 ,VEGF165)基因的复制缺陷性腺病毒(Adenovirus serotype 5,Ad5)即Ad5-VEGF165-CMV-EGFP在体外通过孵育的方法转染静脉桥然后再行血管旁路移植术,研究VEGF165基因所表达的蛋白对自体移植静脉内膜的影响。方法:购买来的Ad5-VEGF165-CMV-EGFP在人胚肾293细胞上扩增到需要病毒数后经过氯化铯(caesium chloride , CSCL)梯度离心法纯化。经过PCR鉴定腺病毒确实含有目的基因后冷冻备存。在自制血管支撑器辅助下行兔左侧股动脉搭桥手术,桥血管采用股静脉。实验组股静脉浸泡于含VEGF165腺病毒的溶液中(病毒滴度为1.0×109pfu/ml),对照组浸泡于盐水中,对照组和实验组都需37℃孵育30分钟,温盐水冲洗备用。依次在术后2d、4d、6d、8d、10d、12d、14d、3w、4w、5w、6w、7w从实验组和对照组中各处死一只实验动物,对桥血管VEGF165基因行RT-PCR检测。用测微尺测量实验组和对照组的股静脉的内膜的厚度,进行统计学分析。计算静脉内膜的增生指数,绘出股动脉搭桥术后时间—移植静脉内膜增生曲线。还对移植静脉进行HE和弹力纤维染色直接观察内膜增生的组织学变化。结果: Ad5-VEGF165-CMV-EGFP能够在293细胞很好的扩增,转染11天就可以收毒。经过三代扩增、纯化就能得到腺病毒颗粒数2.5×1011 VP/ml,滴度为1×1010 PFU/ml。在股动脉搭桥手术中用自制的血管支撑器会带来很多便利,如对初学者来说提高吻合成功率、缩短手术时间约10分钟。静脉桥mRNA检测得出术后两天就有表达,一直可以持续的6周。HE染色和弹力纤维染色提示转基因组移植静脉的内膜增生较对照组小,但也增生。两者结果经过Wilcoxon符号秩检验得出具有显著性差异,有统计学意义。内膜增生指数也显示对照组比转基因组增生严重。结论:腺病毒介导VEGF165基因通过体外孵育方法转染静脉桥可以抑制内膜增生,对术后再狭窄起到一定的预防作用。