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目的: 观察缺氧/复氧损伤后体外培养的星形胶质细胞细胞周期蛋白D1（CyclinD1）表达的变化，及亚低温干预对星形胶质细胞CyclinD1表达的影响，探讨亚低温对脑缺血再灌注损伤的可能保护机制。
方法: 利用新生24小时内的SD大鼠，取皮层新鲜脑组织，参照McCarthy等的方法加以改进进行星形胶质细胞（astrocyte,AC）原代培养，调整细胞密度为5×105/cm2，接种到含胎牛血清培养基的培养瓶中，置于细胞培养箱内。利用倒置显微镜观察AC生长及分化的形态学变化。7-8天后传代，传至第3代，细胞自然纯化后，采用神经胶质纤维酸性蛋白（glia fibrillary acid protein，GFAP）免疫细胞化学染色法鉴定AC，95％以上为阳性细胞，符合实验要求。将AC分为正常对照组?、常温缺氧/复氧组(H/R)、亚低温干预缺氧/复氧组(M+H/R)。用三气培养箱分别调节温度37℃及32℃，以95％N2和5％CO2造成细胞缺氧，50min后始记缺氧损伤时间，缺氧完毕后回复正常条件培养开始记时复氧时间。每组设缺氧8小时，复氧4小时,8小时,12小时,16小时,20小时6个时间点，建立AC缺氧/复氧模型。用倒置相差显微镜观察各个时间点AC的形态学变化，台盼蓝染色法测定AC的存活率，作为细胞损伤指标，细胞免疫荧光技术观察CyclinD1表达的变化，Western-blot法半定量分析CyclinD1表达的变化。
结果:
1.体外培养AC及GFAP鉴定结果： AC传3代后，细胞呈星形，胞体较大而扁，突起较多而长，呈放射状。GFAP免疫细胞化学染色鉴定AC，95％为阳性。胞体呈三角形，胞浆呈棕黄色，深褐色为强阳性，突起细，胞膜光滑，边界清楚。
2.倒置显微镜观察及台盘蓝染色结果：AC在缺氧复氧条件下随干预时间延长而呈现不同的形态学变化，缺氧8小时后，37℃及32℃组AC的形态，存活力变化不明显，仅部分细胞边缘皱缩。随复氧时间的延长，37℃组AC损伤逐渐明显，有的细胞轮廓模糊，细胞肿胀、胞浆有空泡形成。突起增粗缩短，细胞间连接断裂，逐渐出现细胞死亡、崩解、胞体悬浮,呈不同程度的纤维样变，细胞存活力下降明显，32℃组可见少数细胞胞体肥大，胞内颗粒变性，细胞分离。大部分AC轮廓较清晰，胞周光晕明显，突起尚存。细胞损伤出现的时间要比常温组晚，细胞存活力较37℃组增高。
3.细胞免疫荧光化学染色：AC呈多边形，胞体大，突起可见，胞核呈椭圆形，位于细胞中央，CyclinD1阳性产物为绿色，37℃正常氧供时CyclinD1的表达无明显变化；缺氧8小时后,CyclinD1免疫反应强度增加；复氧后，随时间延长呈明显增高趋势, 32℃组各时间点CyclinD1的免疫表达均较37℃组减少。
4.Westernblot法检测：37℃正常氧供时CyclinD1的表达无明显变化；缺氧8小时后CyclinD1的表达量增多；随复氧时间延长呈增高趋势，与对照组相比差异有显著性(p<0.01)，32℃组CyclinD1的表达量在各个时间点与对照组相比差异有显著性（p<0.01）,均较37℃组减少(p<0.05，p<0.01)。
结论:
1.缺氧/复氧造成星形胶质细胞损伤，亚低温可减轻缺氧/复氧对星形胶质细胞的损伤。
2.星形胶质细胞的CyclinD1对缺氧/复氧损伤非常敏感，缺氧/复氧可导致其表达大量增加，通过抑制CyclinD1表达来调控细胞周期，可能是亚低温脑保护的作用机制之一。