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目的 1、了解中国东北地区献血员中人类疱疹病毒8(HHV-8)DNA和特异性IgG抗体的检出情况，探讨不同性别、民族、血型以及不同年龄段之间HHV-8DNA检出率的差异；并比较应用不同寡肽(oligopeptide)做抗原以酶联免疫吸附法(ELISA)检测HHV-8特异性IgC抗体的差异。 2、检测天疱疮、大疱性类天疱疮和寻常型银屑病患者的皮损、外周血单一核细胞(PBMCs)和咽拭子中HHV-8DNA以及血清中HHV-8特异性IgG抗体，探讨HHV-8在这些疾病发病中的可能作用。 3、检测天疱疮、大疱性类天疱疮和寻常型银屑病患者的皮损、PBMCs和咽拭子中Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)DNA以及血清中抗HSV-Ⅰ的IgM、ISG抗体，探讨这些疾病与HSV-Ⅰ的相关性。 材料和方法 1、标本收集 (1)、患者诊断确认：所有寻常型银屑病患者均经临床和组织病理确诊。天疱疮患者的诊断除经临床和组织病理外，还经直接免疫荧光(DIF)、和／或间接免疫荧光(IIF)检查。DIF检查见病损或非病损表皮细胞间有免疫球蛋白和／或C3沉积，IIF检查见部分患者血清中存在抗表皮细胞间抗体。大疱性类天疱疮患者的诊断除经临床和组织病理外，DIF检查见真表皮连接处有免疫球蛋白和／或C3沉积，IIF检查部分患者血清中抗基底膜带抗体阳性。 (2)、献血员和正常对照：采集正常献血员的外周静脉血161份，并从中分离PBMCs 161份、血清40份。收集正常皮肤18份、正常人咽拭子20份。 (3)、寻常型银屑病患者：收集67例寻常型银屑病患者的皮损24份、外周静脉血59份、咽拭子48份，并从外周静脉血中分离PBMCs 59份、血清43份。 (4)、天疱疮和大疱性类天疱疮患者：收集54例天疱疮患者的皮损37份＊周静脉血16份、血清22份。38例大癌性类天抱疮患者的皮损24份、外周静脉血12份、血清9份。 2山NA提取以及DNA浓度测定与调定 O人外周静脉血以红细胞裂解液裂解红细胞后分离PBMCS。 p人以经典的酚一氯仿抽提法提取献血员PBMCS以及天抱疮、大疮性类天抱疮和寻常型银屑病患者的皮损＊，和寻常型银屑病患者咽拭子中的 DNA。 闩X提取的DNA用紫外分光光度计测定260urn和280urn的光密度（ODL并根据此OD值计算DNA的浓度和纯度，然后用TE缓冲液调浓度至 0．lpg／山 3＊物设计 （l）、HHV－8 DNP弓物：以HHV－8高度保守基因一DNA聚合酶（DNP）基因为模板设计一套巢式巩R弓物GQI／GQZ和印3／G则。 （2）、HHV—8 KS330引物：以HHV—8特异性片段一KS330Bam为模板，设计另一套巢式＊CR弓物＊SI／＊因和＊sl／＊SZ。 门XHSV1引物一Pyl245：以HSV叫高度保守基因一DNA聚合酶pNP）基因为模板设计一对单循环PCR引物。 4、PCR扩增 （l）、用 HHV－8 DNP引物做巢式 PCR扩增以检测献血员 PBMCS，以及天疤疮、大癌性类天疮疮和寻常型银屑病患者皮损＊BMCS和咽拭子中的HHV—8 DNP片段。 pX用HHV—8 KS330引物做巢式PCR扩增以检测献血员PBMCS，以及天疮疮、大癌性类天疮疮和寻常型银屑病患者皮损＊BMCS和咽拭子中的HHV—8 KS330片段。 闩X用HSVJ引物PV1245作单循环PCR扩增以检测天疮疮、大癌性类天抱疮和寻常型银屑病患者皮损、PBMCS和咽拭子中的 HSV－IDNP片段。 5JCR产物的回收 用 DNA片段回收试剂盒回收用以 PV1245扩增的 slsbp产物、GQ3／GQ4扩增的 229hp产物、KSI／KSZ扩增的 233hp产物以及地／NSZ扩增的160hP产物。回收的片段用于限制性内切酶分析和测序。 ·2· J 6、PCR产物的酶切鉴定 将PV1245扩增的518hP产物分别以限制性内切酶Smal和BamHI做酶切分析鉴定，KSI／KSZ扩增的233hP产物及NSI／NSZ扩增的160hP产物以限制性内切酶h 做酶切分析鉴定。 7、PCR产物的测序 将 GQ3／GQ4扩增的 229hp产物用聚乙二醇河EG）沉淀纯化或用 DNA片段回收试剂盒回收后用 ABIPRISM BigDye＊ Terminator Cycle SeguencingRea勿Re。non it with AmPlitaa DNA PObmerase做测序反应后在ABIPRISM’“377XL全自动DNA测序仪上完成测序。 8人LISA法检测血清抗体 （八分别以 HHV－8 ORF65刀RF KS．l寡肽为单一抗原，并将H者混合做混合抗原，用ELISA法检测献血员，以及天疮疮、大癌性类天疮疮和寻常型银屑病患者血清中 HHV－8特异性 IgG抗体。 p入用 HSVJ I咖＊gG抗体检测试剂盒检测献血员，以及天抱疮、大抱性类天抱疮和寻常型银屑病患者血清中抗HSVJ的吃M＊gG抗体。 9、检测结果的统计学分析 以X‘检验比较分析： O人不同性别、民族、血型和不同年龄段献血员的HHV－8 DNA检出率差异，以及应用不同寡肽抗原做ELISA检测献血员血清HHV－8特异性IgG抗体的检出率差异。 pX天抱疮、大疮性类天抱疮和寻常型银屑病患者HHV－8 DNA和IgG抗体检出率与正常对照的差异，以及天疮疮、寻常型银屑病患者不同类型间HHV－8 DNA和p