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多糖作为黄伞(Pholiota Adiposa 中主要的活性成分,其具有抗氧化、抗肿瘤、降血脂、抑菌、调节免疫力等多种生物活性,但关于黄伞多糖体外抗肿瘤活性的研究较少,故本课题选取黄伞子实体作为实验原料,研究了不同溶剂酸碱性及脱蛋白对黄伞多糖体外抗肿瘤活性的影响,并对其诱导肿瘤细胞凋亡进行了初步研究,主要研究结论如下:本实验研究了提取溶剂酸碱性和脱蛋白工艺对黄伞多糖得率及对正常体细胞和肿瘤细胞的影响。研究发现0.1mol/L氢氧化钠溶液制备的黄伞多糖得率(11.02%)显著高于0.1mol/L盐酸溶液制备的黄伞多糖得率(9.26%)和水制备的多糖得率(9.08%),此外脱蛋白工艺能够显著提高黄伞多糖的纯度,其中脱蛋白酸溶性黄伞多糖的纯度上升最大,达到73.91%,其次是脱蛋白水溶性黄伞多糖(66.23%),最小的是脱蛋白碱溶性黄伞多糖(45.11%)。黄伞多糖对肝细胞、成肌细胞、成纤维细胞三种正常体细胞毒性试验结果表明,酸溶性黄伞多糖毒性最弱,其次是水溶性黄伞多糖,经过脱蛋白后,黄伞多糖毒性均明显降低。而黄伞多糖对宫颈癌细胞、结肠癌细胞、肝癌细胞三种人体肿瘤细胞增殖抑制作用研究发现脱蛋白酸溶性黄伞多糖对三种人体肿瘤细胞增殖抑制效果明显高于未脱蛋白酸溶性黄伞多糖及脱蛋白和未脱蛋白的碱溶性和水溶性黄伞多糖,在考虑对正常体细胞安全浓度前提下,其对宫颈癌细胞的增殖抑制效果最佳,当浓度为1mg/mL时增殖抑制率达到38.1±1.75%。通过红外光谱对六种黄伞多糖进行分析发现脱蛋白酸溶性多糖在1078士4cm-1和759.83cm-1处有最强吸收峰,表明其C-O-H或C-O-C和环氧基团含量高于其它5种黄伞多糖,初步推测黄伞多糖对人肿瘤细胞增殖抑制效果可能与其官能团存在一定联系,选取脱蛋白酸溶性黄伞多糖及宫颈癌细胞进行后续研究。本实验采用DEAE-纤维素柱层析对脱蛋白酸溶性黄伞多糖进行一级纯化得到SPAP2-1、SPAP2-2两种黄伞多糖级分,其得率分别为62.41%,3.82%。SPAP2-1和SPAP2-2对肝细胞、成肌细胞、成纤维细胞毒性试验研究发现,SPAP2-1对三种正常体细胞的毒性要明显弱于SPAP2-2。SPAP2-1和SPAP2-2对宫颈癌细胞增殖抑制作用的结果表明,在考虑对三种正常体细胞安全浓度的前提下,SPAP2-1对宫颈癌细胞增殖的抑制效果明显高于SPAP2-2,且在浓度为4mg/mL、作用时间为48h时达到最佳,抑制率为73.52±1.36%。通过PI单染色法考察SPAP2-1对宫颈癌细胞生长周期的影响,研究发现SPAP2-1能有效地阻滞宫颈癌细胞于G1期;通过Annexin V-FITC和PI双染色法研究SPAP2-1对宫颈癌细胞凋亡率的试验结果表明,SPAP2-1能有效地诱导宫颈癌细胞凋亡。黄伞分布广泛,资源丰富,其最主要的活性物质多糖具有良好的抗肿瘤活性,为进一步开发利用黄伞资源提供了理论基础。