【摘 要】
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目的:构建结核分枝杆菌Ag85A和HSP70嵌合真核表达质粒,为结核病DNA疫苗的进一步研究奠定基础。 方法:1.pUCm-Ag85A质粒的构建以结核分枝杆菌H37RvDNA为模板,PCR扩增Ag85A基因,
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目的:构建结核分枝杆菌Ag85A和HSP70嵌合真核表达质粒,为结核病DNA疫苗的进一步研究奠定基础。
方法:1.pUCm-Ag85A质粒的构建以结核分枝杆菌H37RvDNA为模板,PCR扩增Ag85A基因,装入pUCm-T载体,送上海Sanggong生物工程公司测序。2.pCI-Ag85A质粒的构建和鉴定pUCm-Ag85A质粒经酶切后,定向插入pCI-neo载体的NheI和XbaI位点之间,构建成pCI-Ag85A质粒。3.pCI-Ag85A-HSP70质粒的构建与鉴定以pcDNA3.1-HSP70质粒为模板,扩增HSP70(含终止密码),然后将其定向插入pCI-Ag85A质粒的EcoRI和XbaI位点之间,构建成pCI-Ag85A-HSP70嵌合DNA真核表达质粒,然后送基康生物工程公司测序。
结果:重组真核表达质粒pCI-Ag85A和pCI-Ag85A-HSP70经酶切鉴定和测序鉴定,证实构建正确。
结论:结核分枝杆菌Ag85A与HSP70嵌合DNA真核表达质粒构建成功,为进一步研究Ag85A与HSP70嵌合DNA疫苗免疫保护效果,研制新型的结核病疫苗奠定基础。
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