人子宫颈癌M2型巨噬细胞浸润与T细胞亚型的相关性及其调节作用

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目的:探讨巨噬细胞、M2型巨噬细胞在人子宫颈癌微环境的分布及其与肿瘤内浸润的FOXP3+T、CD8+T细胞数量的相关性,并分析巨噬细胞、M2型巨噬细胞浸润与临床病理特征的相关性;观察巨噬细胞、M2型巨噬细胞表达B7-H4和B7-DC的情况;体外实验检测重组B7-H4蛋白对宫颈癌患者外周血活化T细胞增殖、凋亡及细胞亚型的影响。方法:应用免疫组织化学染色法观察巨噬细胞和M2型巨噬细胞在60例子宫颈癌组织、10例高级别鳞状上皮内病变组织和10例宫颈组织的分布;用免疫荧光双标染色法分析宫颈癌组织内浸润的FOXP3+T细胞数量、CD8+T细胞数量及粒酶B分泌情况;并分析上述两种巨噬细胞表达B7-H4和B7-DC的情况。体外分离10例宫颈癌患者外周血T细胞,流式细胞术检测与B7-H4混合培养48h后的活化T细胞增殖、凋亡及各亚型T细胞的比例。结果:1、巨噬细胞和M2型巨噬细胞大量分布于宫颈癌微环境,显著高于高级别鳞状上皮内病变及子宫颈组织(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000)。宫颈癌微环境内浸润的巨噬细胞数量也明显多于M2型巨噬细胞(P=0.000)。2、伴淋巴结转移和癌栓的宫颈癌间质巨噬细胞数及m2型巨噬细胞数均显著高于无淋巴结转移和癌栓的巨噬细胞及m2型巨噬细胞数(p=0.001,p=0.011;p=0.035,p=0.019),但巨噬细胞和m2型巨噬细胞数与宫颈癌患者年龄,肿瘤浸润深度和组织学类型间无相关性(p>0.05)。3、60例宫颈癌组织中,间质内有较多的cd8+t和foxp3+t细胞浸润,计数每例5个高倍视野的细胞平均数,foxp3+t细胞为84.45±37.90,cd8+t细胞为126.75±78.19,但分泌粒酶b的cd8+t细胞明显减少,为72.4±36.51。4、宫颈癌组织中巨噬细胞和m2型巨噬细胞与foxp3+tregs细胞数之间均呈正相关(r=0.317,p=0.014;r=0.294,p=0.023),与cd8+t细胞数及粒酶b分泌细胞数无相关性(p>0.05)。5、在宫颈癌间质内,m2型巨噬细胞可表达b7-h4,但不表达b7-dc;而巨噬细胞均不表达b7-h4或b7-dc。6、宫颈癌患者外周血活化t淋巴细胞与重组b7-h4蛋白共培养48h后,b7-h4组cd4+t、cd8+t细胞的ki67指数为(11.45±2.24)%和(2.78±1.01)%,而空白组则分别为和(10.30±1.72)%和(3.48±1.23)%,无明显差异。t细胞亚群占比分别为:b7-h4组和空白组cd4+t/cd3+t细胞为(42.1±1.9)%和(39.8±2.6)%;cd8+t/cd3+t细胞为(36.1±3.7)%和(56.2±2.2)%(p<0.05);cd4+t/cd8+t细胞为1.17,高于空白组的0.71;foxp3+t占cd4+t细胞的百分比为55.4%,高于空白组的52.4%。凋亡率分别为:b7-h4组和空白组总t细胞凋亡率为(27.8±3.29)%和(25.1±1.98)%,其中cd4+t细胞的凋亡率分别为(26.9±2.05)%和(24.8±2.17)%,而CD8+T细胞凋亡率为(36.1±2.34)%,明显高于空白组(28.0±2.36)%(P<0.05)。结论:巨噬细胞和M2型巨噬细胞在宫颈癌微环境内大量分布,与浸润的FOXP3+T细胞数量呈正相关,也与淋巴结转移和癌栓有关。M2型巨噬细胞可通过表达B7-H4,促进CD8+T细胞凋亡,但对Tregs细胞无明显作用。M2型巨噬细胞在宫颈癌微环境发挥着重要的免疫抑制作用,可能成为肿瘤免疫治疗新的靶点。
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