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研究背景:随着环境的恶化,肺癌逐渐成为全球主要的恶性肿瘤。根据2007年全球癌症统计数据分析,约26%的女性癌症类死亡和31%的男性癌症死亡均由肺癌引起,肺癌发病率和死亡率在男性所有癌症类型中均排名第一。而且,近年来女性肺癌患者的数量也呈现明显上升态势,现肺癌在女性癌症死亡率亦占有举足轻重的地位。肺癌由于其早期临床标志性临床表现较少,往往不易发现,错过了最佳的治疗时期,故发现以中晚期肺癌为主。对于中晚期肺癌特别是晚期肺癌的治疗,传统的治疗方式以化疗为主,虽然近年来随着低剂量螺旋CT的不断普及和靶向药物在临床的逐渐应,大大提高了中晚期肺癌病人的生活质量及生存时间,但是不可否认的是,靶向药物的治疗对中晚期肺癌的治疗仍有很大的局限性,故寻找有效的新的肺癌治疗手段,仍是现在肺癌防治的重中之重。目的:本研究旨在讨论Src在NSCLC中对于瘤细胞的侵袭性及增生能力及转移性起着极为重要的作用,Src作用于下游的Fn 14蛋白,通过Fn 14作用于NF-κB途径而发挥作用。方法:取A549胞系培养传代后,构建成熟的shSrc载体及过表达Fn14载体后,将shSrc载体及相应空白质粒转染入A549细胞后,可将细胞分成四组:(1)正常组,即A549正常细胞组;(2)ShSrc组,即转染入含有靶向Src mRNA的特异性shRNA寡核苷酸;(3)NC组,即将A549细胞内转染入非靶向的shRNA;(4)shSrc+Fn14组,即Src沉默的A549细胞中,使Fn14过表达。其后以Transwell实验、细胞划痕实验、平板克隆实验检测四组A549细胞的增殖、侵袭性。同时以免疫荧光检测NF-κB途径的活跃程度、以Western Blot实验检测Fn14、NF-κB、IκBα相应蛋白的表达情况。结果:1.平板克隆实验反应的是瘤细胞在无支持物情况下的细胞增殖能力的强弱:Src沉默后的A549细胞的细胞增殖能力明显低于其他组。2.细胞划痕实验用以评价A549细胞的迁移能力:Src沉默后的A549细胞的细胞迁移能力明显低于其他组,而Src沉默后的A549细胞中过表达Fn14使A549细胞的迁移能力得以恢复。3.Transwell实验用以评价A549细胞的侵袭能力:Src沉默后的A549细胞的细胞侵袭能力明显低于其他组,而Src沉默后的A549细胞中过表达Fn14使A549细胞的侵袭能力得以恢复。4.免疫荧光实验:检测NF-κB p65,在一定程度上可以反映NF-κB途径的活跃程度:Src沉默后的A549细胞细胞核中NF-κB p65明显减少,而Src沉默后的A549细胞中过表达Fn14使A549细胞细胞核中NF-κB p65得以提升;5.Western Blot实验:检测Fn14在四组细胞中的表达情况,以再次证实实验模型构建的可靠性。检测NF-κB p65表达情况,以反映NF-κB途径的活跃程度:Src沉默后的A549细胞中NF-κB p65明显减少,而Src沉默后的A549细胞中过表达Fn14使A549细胞中NF-κB p65得以提升。检测IκBα以反映其表达情况:Src沉默后的A549细胞中IκBα明显减少,而Src沉默后的A549细胞中过表达Fn14使A549细胞中IκBα得以提升。结论:在A549胞系中,Src对于该细胞的侵袭、增殖、迁移能力具有至关重要的作用,Src作用于下游的Fn 14蛋白后,通过Fn 14作用于NF-κB途径而发挥作用。