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目的:
研究Aurora—A激酶对乳腺永生化细胞MCF-10A的恶性转化作用及转移能力的影响,初步探讨Aurora—A激酶对三维培养体系下的乳腺永生化细胞的影响;为进一步深入探讨Aurora—A激酶的作用、三维培养体系在肿瘤研究的作用提供一定的证据。
方法:
用逆转录病毒法转染MCF-10A细胞株,通过药物筛选获得稳定高表达Aurora-A的MCF-10A细胞株,用Western印迹法检测Aurora—A在细胞中的表达情况。用细胞计数法检测Aurora—A高表达对MCF-10A细胞生长的影响;用间接免疫荧光法在激光共聚焦显微镜下观察三维培养体系中Aurora—A高表达对MCF-10A细胞增殖、凋亡的影响;观察细胞极性、细胞间黏附能力及细胞骨架结构的变化;用迁移实验研究Aurora—A对MCF-10A细胞迁移能力的影响。
结果:
用逆转录的方法转染细胞并通过药物筛选,我们获得了稳定高表示Aurora-A的MCF-10A细胞株;用细胞计数和间接免疫荧光法都证实Aurora-A激酶在二维和三维培养体系中都能促进MCF-10A细胞的增殖;在三维培养体系中Aurora—A对细胞凋亡也起促进作用;但Aurora—A对MCF-10A细胞的增殖作用较凋亡作用明显。高表达Aurora—A可以改变三维培养体系中的乳腺细胞极性,上皮细胞的极性蛋白分子表达分布发生改变,细胞间的粘附力减弱,细胞骨节结构发生改变,细胞的迁移能力增强。
结论:
Aurora—A激酶有促进乳腺永生化细胞MCF-10A增殖的作用,在三维培养体系中Aurora—A促增殖和促凋亡作用是同时存在的,而且促增殖的作用较促凋亡的作用强。高表达Aurora—A可以破坏三维培养体系中的细胞极性,上皮细胞的极性蛋白分子表达分布发生异常;细胞间黏附分子的表达降低,细胞间的粘附力减弱,细胞的迁移能力增强。总之,三维培养体系下Aurora—A激酶具有促进乳腺永生细胞MCF-10A恶性转化及转移的作用。