【摘 要】
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目的本课题组的前期研究表明,重症乙型肝炎患者中钾离子通道相关基因KCNJ15异常高表达。本研究克隆了KCNJ15的启动子,并探讨了HBV编码的病毒蛋白(HBc、HBs及HBx)对其的激活作
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目的本课题组的前期研究表明,重症乙型肝炎患者中钾离子通道相关基因KCNJ15异常高表达。本研究克隆了KCNJ15的启动子,并探讨了HBV编码的病毒蛋白(HBc、HBs及HBx)对其的激活作用,初步阐明了KCNJ15基因在重症乙型肝炎中高表达的原因。方法根据GeneBank中人类KCNJ15基因图谱设计引物,以重症肝炎患者的基因组为模板扩增KCNJ15基因5’端;Truncation法确定启动子全长区域。克隆其全长启动子,构建KCNJ15启动子荧光素酶报告基因质粒,转染CHO和HepG2细胞系,通过检测荧光素酶相对活性探讨HBV编码蛋白对KCNJ15基因的调控作用。结果确定了1170bp的KCNJ15F2片段已经包含了KCNJ15基因的全长启动子; HBV相关蛋白HBx可增强KCNJ15基因启动子的活性。结论研究中,我们确定了KCNJ15基因全长启动子,并成功地构建了KCNJ15启动子荧光素酶报告基因质粒;KCNJ15基因ATG上游-268bp和-81bp之间为激活该基因的重要的转录调控区域,含有包括MBF-1、T-Ag、GHF-1、MBF-1和HNF-3等反式作用因子的作用位点;HBV相关蛋白HBx可上调KCNJ15的表达,从而参与了重症乙型肝炎的发生发展。
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