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目的:探讨L—肌肽对H2O2诱导PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)凋亡的保护作用的机制。
方法:我们在H2O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上,加入肌肽作用于细胞,采用MTT比色法检测肌肽对PC12细胞的增殖抑制作用;通过倒置相差显微镜观察细胞形态的变化;RT—PCR法检测凋亡相关基因Caspase—3和NF—κ BP65 mRNA的表达变化;免疫组化SABC法检测凋亡相关蛋白Caspase—3和NF—κ BP65的表达,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡。
结果:不同浓度的肌肽对H2O2损伤的PC12细胞的存活率有显著的提高作用,20mmol/L浓度时达最大值(P<0.05)。20mmol/L的肌肽作用于PC12细胞可降低其Caspasc—3和NF—κ BP65的mRNA表达,降低Caspase—3和NF—κ BP65蛋白的表达,流式细胞仪检测显示肌肽可抑制细胞的早期和晚期凋亡率。
结论:
1.肌肽可以降低由H2O2导致的PC12细胞的体外生长和增殖的抑制率,即肌肽能够保护PC12细胞免受氧化应激的损伤。
2.肌肽可以降低由H2O2诱导的PC12细胞Caspase—3和NF—κ BP65基因的mRNA和蛋白的表达,在转录和翻译水平均得到证实。说明肌肽可以抑制由H2O2诱导的PC12细胞的凋亡。
3.肌肽可以抑制由H2O2诱导的PC12细胞的早期凋亡和晚期凋亡,其机制可能是通过抑制NF-K BP65基因的表达,从而抑制Caspase-3的表达,以达到抑制细胞的凋亡。