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背景滋养层细胞分化异常可导致滋养层细胞侵润和迁移异常,引发子痫前期(Pre-eclampsia,PE)等妊娠相关疾病。子痫前期是一种妊娠期特有的多器官多系统受影响的高血压综合征,多于妊娠20周后出现,并以高血压、蛋白尿等症状为主要表现,世界范围内的发病率约为3%~5%,是孕产妇及新生儿死亡的重要原因之一。微小RNA(miRNA,MicroRNA)是一类调节基因转录后表达的短链非编码小分子。在妊娠期间,miRNA参与一系列的反应,包括胚胎植入前的子宫内膜准备,与免疫反应相关的基因重组,胎盘发育和血管生成等过程,并且长期以来一直被认为与胎盘发育异常和妊娠并发症息息相关。研究表明,多种miRNA在胎盘中大量表达,且miRNA在胎盘中的异常表达可能是引发子痫前期的病因之一。但目前仍需深入研究miRNA对胎盘发育的影响及其具体作用机制。在前期实验研究中,已发现miR-181a-5p是一种在重度子痫前期患者的血浆和胎盘中表达均上调的miRNA。本课题着重研究了miR-181a-5p在胎盘滋养层细胞侵润和迁移中的作用及分子机制,从而深入了解重度子痫前期的发病机制。目的通过本课题,阐明miRNA-181a-5p在胎盘滋养层细胞侵润及迁移中的作用及其潜在分子机制,以期深入了解miRNA在胎盘发育及子痫前期发生发展中的作用。材料和方法1.根据纳入及排除标准(参照第八版《妇产科学》)收取胎盘组织样品,均匀取样清洗后,直接液氮冻存备用。2.通过使用四个免费数据库(包括TargetScan 7.0,PITA,PicTar和miRanda)预测miR-181a-5p直接作用的靶基因,将IGF2BP2作为待选的miR-181a-5p直接底物并进行后续实验设计。3.在重度子痫前期产妇胎盘中,采用RT-qPCR技术检测miRNA-181a-5p表达水平;采用Western Blot技术检测IGF2BP2蛋白的表达。4.采用Transwell细胞侵润迁移实验研究miR-181a-5p对HTR-8/SVneo细胞的侵润和迁移的作用。5.构建荧光素酶载体后,将其与miR-181a-5p模拟物或抑制剂共转染后,通过双荧光素酶测定实验检测荧光素酶报告基因活性,并通过RT-qPCR和Western Blot技术检测了miR-181a-5p在HTR-8/SVneo细胞中对IGF2BP2 mRNA和蛋白质水平的影响,从而验证miR-181a-5p是否直接抑制IGF2BP2。6.采用Transwell细胞侵润迁移实验探究过表达或抑制IGF2BP2时,其对HTR-8/SVneo细胞侵润和迁移能力的影响。7.在转染miR-181a-5p的HTR-8/SVneo细胞中共转染IGF2BP2基因的过表达质粒,采用Transwell细胞侵润迁移实验检测侵润迁移能力的变化和Western Blot技术检测IGF2BP2表达量改变,从而探究miR-181a-5p对滋养层细胞侵润和迁移的抑制作用是否通过直接抑制IGF2BP2实现。结果1.在重度子痫前期产妇胎盘中,miRNA-181a-5p表达显著上调,IGF2BP2蛋白表达量显著下调。2.miR-181a-5p抑制HTR-8/SVneo细胞的侵润和迁移,而IGF2BP2促进HTR-8/SVneo细胞的侵润和迁移。3.miR-181a-5p直接抑制IGF2BP2。4.miR-181a-5p通过IGF2BP2 mRNA 3’-UTR上的保守结合位点对IGF2BP2产生抑制作用。5.miR-181a-5p通过直接降调IGF2BP2抑制滋养层细胞的侵润和迁移。结论本课题证明了miR-181a-5p通过直接降调IGF2BP2的表达抑制胎盘滋养层细胞的侵润和迁移,从而揭示了miR-181a-5p在重度子痫前期疾病中的潜在作用机制。